弓形虫表面抗原SAG1基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

• 作者: 汪学龙 沈继龙 王维 都建
• 来源期刊: 临床输血与检验
• 学科: 医学
• 关键词: 弓形虫 膜表面抗原 基因克隆与表达
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 4-7
• 页数: 4页
• 分类号: R382.5|R392.11
• 字数: 2415字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-2587.2004.01.002

摘要

目的体外扩增弓形虫RH株膜表面抗原SAG1编码基因,构建原核表达质粒,并表达SAG1编码基因序列.方法收集、纯化RH株速殖子,提取RNA,据已知的SAG1基因序列,在设计合成的1对引物中引入EcoRI和HindⅢ酶切位点.应用RT-PCR技术,扩增SAG1基因片段,插入原核表达质粒pET28a中,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,重组子经EcoRI和HindⅢ双酶切、PCR鉴定,转化宿主菌BL21,并以IPTG诱导表达.结果从弓形虫RH株RNA中扩增出1 011 bp的SAG1基因片段,构建重组质粒pET28a/SAG1,酶切和PCR鉴定产物大小均与预期值相符;IPTG诱导,SDS-PAGE显示表达产物的大小约34.8 kD.结论成功地从弓形虫RH株RNA中获取SAG1基因,构建了pET28a/SAG1重组质粒并获得了高效表达,为免疫学诊断和蛋白质疫苗的研究创造了条件.