弓形虫表面抗原SAG1基因的克隆表达、纯化与鉴定

• 作者: 刘晓泉 朱穗京 杨雯 田春林
• 来源期刊: 广西医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 弓形虫 SAG1基因 克隆表达 纯化 免疫反应性
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 205-208
• 分类号: R382.5
• 字数: 3403字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-930X.2010.02.013

摘要

目的:构建弓形虫SAG1基因原核表达质粒,诱导表达重组蛋白SAG1,分离纯化并检测其免疫反应性.方法:设计一对特异引物,体外扩增SAG1目的基因(双酶切纯化后)定向克隆至质粒pET29a(+)中,转化到大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21,采用PCR、双酶切和测序等方法鉴定,并以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白的表达情况,经镍离子柱纯化重组蛋白后,用蛋白质印迹(Western blotting)分析与小鼠弓形虫阳性血清的免疫反应性. 结果:重组质粒经PCR、双酶切反应和测序鉴定,产物的大小与结构均与预期值相符,经IPTG诱导后,稳定表达相对分子量(Mr)为28 950的蛋白,纯化后的重组蛋白经Western blotting分析显示,与小鼠弓形虫感染血清有特异性反应条带.结论:成功构建重组表达质粒pET29a(+)-SAG1,使弓形虫表面抗原SAG1在体外获得表达,分离纯化的SAG1重组蛋白有免疫反应性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	田春林	广西医科大学寄生虫学教研室	43	155	6.0	9.0
2	刘晓泉	广西医科大学寄生虫学教研室	24	97	6.0	7.0
3	杨雯	广西医科大学寄生虫学教研室	5	20	3.0	4.0
4	朱穗京	广西医科大学寄生虫学教研室	3	11	2.0	3.0