弓形虫表面抗原SAG1截短型片段在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化

• 作者: 丁铲 周锦萍 孙泉云 安立刚 王权 蒋蔚 邢小勇 陈永军 龚国华
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 医学
• 关键词: 弓形虫 tSAG1 蛋白表达 蛋白纯化 免疫印迹 ELISA
• 年，卷（期）: 2009,（10）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 136-141
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 5030字
• 语种: 中文

摘要

在大肠杆菌中高效表达及纯化获得可溶性、有反应活性的弓形虫表面抗原SAG1截短型片段(tSAG1),为研制新型的弓形虫病检测试剂奠定基础.构建重组质粒pET-32a-tSAG1并将其转化大肠埃希菌BL21(DE3)表达菌株,在异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导下表达蛋白.SDS-PAGE分析表达产物的表达形式,通过降低培养温度、降低摇床转数和升高LB液体培养基pH,诱导目的蛋白在上清中表达,利用His·Bind(R) Kit试剂盒对目的蛋白进行纯化,Western blot和ELISA检测纯化蛋白的反应原性.在IPTG为1 mmol/L、温度37℃条件下,tSAG1以融合蛋白(His-tSAG1)的形式在大肠埃希菌中高效表达,表达产物以包涵体形式存在.在22℃和LB培养基pH为7.7条件下,融合蛋白主要在上清中表达.Western blot和ELISA分析纯化蛋白能被弓形虫的阳性血清所识别.tSAG1在大肠埃希菌中得到了可溶性蛋白表达,经纯化后能被弓形虫的阳性血清所识别,可用于制备检测弓形虫病的诊断试剂.