弓形虫膜表面抗原SAG2蛋白的高效表达及免疫活性分析

• 作者: 王权 聂福旭 胡永浩 蒋蔚 陈永军
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 刚地弓形虫 SAG2 蛋白表达 免疫活性
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 173-178
• 页数: 6页
• 分类号: Q5
• 字数: 4879字
• 语种: 中文

摘要

在大肠杆菌中以可溶性形式高效表达弓形虫膜表面抗原SAG2蛋白,并对其免疫活性进行分析.应用PCR技术从刚地弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码SAG2的基因片段,亚克隆至原核表达载体pET32a(+),在大肠埃希菌(E.coli)BL21内表达,并对其表达条件进行优化,Western blotting和ELISA分析纯化蛋白的免疫原性;纯化的重组蛋白免疫小鼠制备多抗,用间接免疫荧光试验(IFA)分析表达蛋白的免疫反应性.成功构建重组质粒pET32a(+)-tSAG2,所表达的融合蛋白大小约为38 kD.在IPTG终浓度为0.1 mmol/L、诱导时间4-6 h和培养温度32℃条件下,重组SAG2蛋白主要以可溶性形式在大肠杆菌中高效表达,每升培养菌液约获得可溶性重组SAG2蛋白16 mg.Western blotting及ELISA结果显示纯化蛋白具有良好的免疫原性.IFA显示重组蛋白的抗血清能够识别刚地弓形虫表面的SAG2天然蛋白,所表达蛋白具有良好的免疫反应性.截断的SAG2基因在大肠杆菌中得到了高效表达,重组蛋白保持了天然蛋白的免疫活性,为进一步利用该重组蛋白进行弓形虫病免疫诊断及基因工程亚单位疫苗的研制奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王权	中国农业科学院上海兽医研究所	65	346	11.0	15.0
2	胡永浩	甘肃农业大学动物医学院	96	391	9.0	16.0
3	蒋蔚	中国农业科学院上海兽医研究所	25	104	6.0	9.0
4	陈永军	中国农业科学院上海兽医研究所	27	211	10.0	14.0
5	聂福旭	甘肃农业大学动物医学院	1	13	1.0	1.0