柔嫩艾美耳球虫表面抗原SAG2基因的克隆与表达

• 作者: 于三科 党海斌 叶秀华 林青 简永利 蔡建平 覃宗华 陈闻
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 柔嫩艾美耳球虫 表面抗原2 基因克隆 表达
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 10-13
• 页数: 4页
• 分类号: S8
• 字数: 3001字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0529-5130.2006.06.004

摘要

根据生物信息学预测的基因序列设计引物,应用RT-PCR方法从柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子总RNA扩增获得了鸡柔嫩艾美耳球虫表面抗原2(surface antigen 2,SAG2)基因序列,将其与pGEM-T easy载体连接后转化E.coli DH5α,筛选阳性克隆,以带有限制酶切位点的特异性引物用PCR方法扩增不含SAG2N端信号肽序列的ORF序列后克隆至表达载体pET-32a(+),构建了重组表达质粒pET-32a(+)-SAG2,并将其转化至E.coli BL21(DE3).经IPTG诱导,获得了SAG2重组抗原在大肠杆菌的高效表达,重组蛋白的表达量约占菌体总蛋白的35%,融合蛋白的分子量约为47 ku.菌体经超声处理后进行SDS-PAGE分析表明,表达蛋白以包涵体的形式存在.