柔嫩艾美球虫杨凌株表面抗原SAG10基因的克隆与原核表达

• 作者: 于三科 余劲术 吕敏娜 吴彩艳 林青 蔡建平 覃宗华 麦博
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 柔嫩艾美球虫 表面抗原10 基因克隆 表达 免疫
• 年，卷（期）: 2007,（9）
• 所属期刊栏目: 病原生物学
• 页码范围: 751-755
• 页数: 5页
• 分类号: S852.723|Q78
• 字数: 4389字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2007.09.006

摘要

从柔嫩艾美球虫第二代裂殖子总RNA中扩增EtSAG10基因,与pGEM-T Easy载体连接后转化大肠杆菌(E.coli)DH5α,筛选阳性克隆,扩增不含N端信号肽的编码序列,分别插入表达载体pET-32a(+)和pMAL-c2X,转化至E.coli Rosetta,以IPTG诱导表达.结果表明,pET-32a(+)-EtSAG10在E.coli Rosetta中的表达产物约占菌体总蛋白的43%,融合蛋白分子质量约为47 ku,以包涵体形式存在;而pMALc2X-EtSAG10在E.coli Rosetta中表达的重组蛋白为可溶性,表达产物约占菌体总蛋白的35%,融合蛋白分子质量约为69 ku.以表达的可溶性EtSAG10重组蛋白100μg/只肌肉注射免疫雏鸡,攻虫后以盲肠病变计分、盲肠卵囊数(OPG)、相对增重率和抗球虫指数(ACI)评价,免疫组相对盲肠卵囊产量为47.7%,抗球虫指数由86.79提高至152.13.提示,重组表达的EtSAG10可诱导雏鸡产生一定的抗球虫免疫保护.