弓形虫P30的克隆表达及其对巨噬细胞凋亡的影响

• 作者: 林建银 章涛 郑大利 黄清玲
• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 弓形虫 主要表面抗原P30 基因克隆 巨噬细胞 凋亡
• 年，卷（期）: 2004,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 670-674
• 页数: 5页
• 分类号: R382.5
• 字数: 4039字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2004.08.005

摘要

目的获得能表达弓形虫P30蛋白的小鼠巨噬细胞克隆并观察内源性表达的P30蛋白对小鼠巨噬细胞凋亡的影响.方法通过PCR扩增获得P30基因片段,定向克隆到真核表达载体pcDNA3.1/Hygro(-)中,利用酶切、DNA序列分析鉴定阳性克隆,采用脂质体将重组质粒转染到RAW264.7巨噬细胞中,通过Hygromycin筛选和PCR、免疫组化鉴定,用流式细胞术DNA倍体分析计算稳定转染和瞬时转染P30 基因的巨噬细胞的凋亡率.结果1.PCR、酶切、连接的产物经电泳鉴定,均与预期设计相符合,DNA序列分析发现重组质粒中的目的基因序列与文献报道相符. 2.PCR和免疫组化鉴定发现转染P30重组质粒的巨噬细胞能稳定地复制质粒并表达弓形虫P30蛋白.3.P30稳定转染的细胞凋亡率均在2%左右,不同细胞之间没有区别.4.瞬时转染空载体和P30重组质粒的巨噬细胞其凋亡率均在6%左右,没有区别. 结论1.获得了含P30基因的重组质粒以及能稳定表达弓形虫P30蛋白的小鼠巨噬细胞克隆. 2.无论是稳定转染还是瞬时转染,均不能引起巨噬细胞的凋亡,说明内源性表达的弓形虫P30蛋白对小鼠巨噬细胞的凋亡没有影响.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林建银	福建医科大学分子医学研究中心	125	908	16.0	23.0
2	章涛	福建医科大学分子医学研究中心	37	107	5.0	9.0
3	黄清玲	福建医科大学分子医学研究中心	28	99	6.0	8.0
4	郑大利	福建医科大学分子医学研究中心	25	115	6.0	9.0