弓形虫GRA1基因的克隆与原核表达

• 作者: 刘慧颖 孙玲 宁静 宫鹏涛 张西臣 李淑红
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 刚地弓形虫 GRA1 克隆 基因表达
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 631-635
• 分类号: R349.64
• 语种: 中文
• DOI: 22-1342/R.20110608.1020.002

摘要

目的:克隆并构建PET-28a-GRA1重组表达载体,转化人大肠杆菌E.coli BL21,诱导表达并鉴定,为进一步研究GRA1的生物学特性和免疫保护作用奠定实验基础.方法:根据GenBank中编码GRA1的已知基因序列设计并合成一对引物,应用PCR技术扩增GRA1基因,插入原核表达载体PET-28a中,构建重组表达质粒PET-28a-GRA1,转化E.coli BL21,IPTG诱导后,进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定.结果:克隆的GRA1基因与GenBank收录的基因序列同源性为100%.对重组质粒进行酶切和PCR鉴定,获得573 bp大小的目的基因片段,与预期结果相符,成功地构建了重组质粒PET-28a-GRA1.SDS-PAGE电泳分析表明重组蛋白条带的相对分子质量约为24 000,Western blotting显示重组蛋白能被鼠抗弓形虫血清识别.结论:成功获取GRA1基因,构建了PET-28a-GRA1重组质粒并获得了高效表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张西臣	吉林大学畜牧兽医学院预防兽医学系	211	623	11.0	18.0
2	宫鹏涛	吉林大学畜牧兽医学院预防兽医学系	134	291	8.0	14.0
3	李淑红	吉林大学白求恩医学院病原生物学教研室	37	244	10.0	13.0
4	孙玲	吉林大学白求恩医学院病原生物学教研室	34	114	6.0	9.0
5	宁静	吉林大学畜牧兽医学院预防兽医学系	3	6	2.0	2.0
6	刘慧颖	吉林大学白求恩医学院病原生物学教研室	2	3	1.0	1.0