弓形虫GRA1基因的体外扩增、克隆及鉴定

• 作者: 贾雪梅 郑焕钦 郭虹 陈观今
• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 弓形虫 致密颗粒抗原1 聚合酶链反应 基因克隆
• 年，卷（期）: 2002,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 17-19，9
• 页数: 4页
• 分类号: R382.5
• 字数: 2790字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2002.03.004

摘要

目的体外扩增弓形虫RH株致密颗粒蛋白GRA1基因,并构建真核表达质粒.方法从接种了弓形虫RH株的小鼠腹水中收集、纯化速殖子,提取基因组DNA;据已知的GRA1基因列,设计合成一对引物,并引入EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点.应用 PCR技术,从弓形虫RH株基因组DNA中扩增GRA1基因片段.扩增目的基因片段经纯化、双酶切后,插入真核表达质粒pEGFP-N3中,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,于卡那霉素阳性LB平板上筛选阳性克隆.重组子经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切、PCR鉴定.结果从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出785bp的GRA1基因片段,构建重组质粒pEGFP N3-GRA1,酶切和PCR鉴定产物大小均与预期值相符.结论成功地从弓形虫RH株基因组DNA中获取了GRA1基因,并构建了pEGFP N3-GRA1重组质粒.为重组质粒的进一步表达和核酸疫苗的研究创造了条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭虹	中山医科大学寄生虫研究所	17	194	9.0	13.0
2	陈观今	中山医科大学寄生虫研究所	26	228	9.0	13.0
3	郑焕钦	中山医科大学寄生虫研究所	17	171	8.0	12.0
4	贾雪梅	昆明医学院寄生虫学教研室	16	66	6.0	7.0