弓形虫GRA1基因的原核表达与鉴定

• 作者: 凌娇 熊挺 王权 蒋蔚 薛俊欣 陈芸 韩阳瑞 龙梦瑶
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 弓形虫 GRA1 原核表达 单克隆抗体 诊断
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 寄生虫
• 页码范围: 70-77
• 页数: 8页
• 分类号: S852.723
• 字数: 5725字
• 语种: 中文

摘要

为深入研究弓形虫致密颗粒蛋白GRAl及其单克隆抗体对弓形虫感染诊断的意义,本研究采用逆转录PCR方法扩增弓形虫RH株截短型GRA1基因,将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达并优化表达条件,SDS-PAGE分析表达情况,并分别通过Western blot和间接免疫荧光检测(indirect immunofluorescence assay,IFA)鉴定蛋白和单抗的免疫原性.结果 表明重组蛋白GRA1高效可溶性表达,分子量约为24 kDa,且在28℃条件下诱导表达效果更好.Western blot显示,重组蛋白GRA1可以被感染弓形虫的犬阳性血清识别,具有良好的反应原性.IFA显示单克隆抗体能够特异性地识别弓形虫的天然蛋白,GRA1主要分布于虫体的细胞质中.本研究结果可为利用GRA1蛋白和其单抗诊断弓形虫感染提供借鉴和依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王权	中国农业科学院上海兽医研究所	65	346	11.0	15.0
2	蒋蔚	中国农业科学院上海兽医研究所	25	104	6.0	9.0
3	韩阳瑞	中国农业科学院上海兽医研究所	2	1	1.0	1.0
4	凌娇	南京农业大学动物医学院	5	7	2.0	2.0
5	薛俊欣		4	2	1.0	1.0
6	陈芸	中国农业科学院上海兽医研究所	1	0	0.0	0.0
7	熊挺	南京农业大学动物医学院	1	0	0.0	0.0
8	龙梦瑶	南京农业大学动物医学院	1	0	0.0	0.0