弓形虫致密颗粒抗原GRA8的原核和真核表达质粒的构建

• 作者: 余新炳 吴少庭 张仁利 林绮萍 袁仕善 高世同 黄达娜
• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 弓形虫 致密颗粒抗原 GRA8 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2004,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 203-206,210
• 页数: 5页
• 分类号: R382.5
• 字数: 4184字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2004.03.010

摘要

目的构建弓形虫RH株致密颗粒抗原GRA8的原核和真核重组表达质粒.方法参照GRA8序列分别设计引物,采用PCR从弓形虫RH株基因组DNA中分别扩增出编码GRA8的基因片段,克隆至pMD18-T载体;菌落PCR鉴定阳性克隆并测序分析;各组阳性克隆的质粒分别亚克隆至原核表达质粒pGEX-4T-2和真核表达载体pVAX1,分别转化大肠杆菌BL21和JM109,PCR和酶切鉴定转化菌落的插入序列;将构建的原核表达菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE和免疫印迹分析融合蛋白的表达;将构建的真核重组表达质粒免疫小鼠,观察其诱导的抗体应答.结果 PCR扩增出GRA8基因的特异片段,各组阳性克隆的序列正确,并分别被亚克隆到原核表达质粒pGEX-4T-2和真核表达载体pVAX1上,构建了弓形虫致密颗粒抗原GRA8的原核和真核重组表达质粒;原核表达质粒在大肠杆菌中表达了GRA8的融合蛋白;真核重组表达质粒诱导小鼠产生了抗弓形虫抗原的抗体.结论以pGEX-4T-2和pVAX1为载体,分别成功构建了GRA8的原核和真核重组表达质粒.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余新炳	中山大学基础医学院	201	1352	17.0	28.0
2	张仁利		192	798	13.0	17.0
3	高世同		137	593	11.0	15.0
4	黄达娜		134	499	10.0	13.0
5	吴少庭		72	281	9.0	12.0
6	袁仕善		20	86	5.0	8.0
10	林绮萍		1	5	1.0	1.0