弓形虫核苷三磷酸水解酶-Ⅱ真核表达质粒的构建与鉴定

• 作者: 刘阳阳 李成朋 林佳鑫 胡昕 蒋凯 谭峰 赵徐寒晖 陈弟 陈镭
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 刚地弓形虫 核苷三磷酸水解酶 真核表达
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 519-521,526
• 页数: 4页
• 分类号: R382.5
• 字数: 2505字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2015.06.005

摘要

目的 构建弓形虫核苷三磷酸水解酶-Ⅱ (NTPase-Ⅱ)基因真核表达质粒pcDNA3.1(+)-NTPase-Ⅱ并在COS-7细胞中进行瞬时表达.方法 以pBAD-HisB-NTPase-Ⅱ质粒为模板,PCR扩增NTPase-Ⅱ目的基因,将其克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体中,双酶切及测序鉴定重组质粒.阳离子脂质体法转染COS-7细胞并经SDS-PAGE和Western Blot检测目的蛋白的表达.结果 经鉴定,弓形虫pcDNA3.1(+)-NTPase-Ⅱ核酸疫苗质粒构建成功.以脂质体法转染COS-7细胞后,转染细胞可成功地表达弓形虫NTPase-Ⅱ蛋白.结论 证实了弓形虫NTPase-Ⅱ蛋白能在真核细胞中表达,为该基因的核酸疫苗研究提供了实验依据.