弓形虫三磷酸核苷水解酶-II的克隆、表达及初步应用

• 作者: 李丽宁 梁韶晖 沙丹 潘长旺 秦茜 诸葛青云 谭峰 黄慧聪
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 弓形虫RH株 速殖子 三磷酸核苷水解酶-II 原核表达 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 312-315
• 页数: 4页
• 分类号: R382
• 字数: 3380字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2008.04.007

摘要

目的 探讨弓形虫RH株速殖子NTPase-II重组蛋白的免疫反应性及其在抗体检测中的应用.方法 通过PCR获得NTPase-II基因,克隆入pGEM-T Easy载体,经酶切与测序鉴定后亚克隆至表达质粒pBAD-HisB,构建原核表达重组质粒,在大肠杆菌中以包涵体形式获得高效表达.SDS-PAGE和Western-blot分析蛋白表达产物.用纯化的表达产物作为诊断抗原,通过对反应条件的优化,初步建立检测抗NTPase-II抗体的间接ELISA方法.结果 PCR扩增得到特异的弓形虫NTPase-II基因序列,经测序鉴定无基因突变.重组质粒诱导表达产物相对分子量约70kD,与理论值相符.经Western-blot证实,重组蛋白可刺激机体产生相应的抗体.具有良好的抗原性和免疫原性.用表达的重组NTPase-II蛋白初步建立了用于NTPase-II抗体检测的间接ELISA方法.结论 重组NTPase-II蛋白具有较强免疫原性,可作为诊断抗原用于急性弓形虫感染诊断试剂的研发.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	诸葛青云	温州医学院寄生虫学教研室	12	112	4.0	10.0
2	潘长旺	温州医学院寄生虫学教研室	64	412	11.0	17.0
3	梁韶晖	温州医学院寄生虫学教研室	35	179	9.0	11.0
4	黄慧聪	温州医学院寄生虫学教研室	41	198	10.0	12.0
5	谭峰	温州医学院寄生虫学教研室	38	128	7.0	9.0
6	秦茜	温州医学院寄生虫学教研室	14	37	3.0	5.0
7	沙丹	温州医学院寄生虫学教研室	4	10	2.0	3.0
8	李丽宁	温州医学院寄生虫学教研室	3	0	0.0	0.0