弓形虫次黄嘌呤-黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因的克隆与原核表达

• 作者: 乔增培 余莉 李霞 沈继龙 罗庆礼
• 来源期刊: 临床输血与检验
• 学科: 医学
• 关键词: 弓形虫 次黄嘌呤-黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 97-101
• 页数: 5页
• 分类号: R382.5|R392.11
• 字数: 3738字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-2587.2007.02.001

摘要

目的 克隆弓形虫RH株次黄嘌呤-黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HXGPRT)基因,构建原核表达载体,并表达该重组蛋白.方法 收集、纯化弓形虫RH株速殖子,提取总RNA,在设计合成的引物中引入BamH Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点.应用RT-PCR扩增弓形虫HXGPRT基因片段,插入克隆载体pMD18-T,提取重组质粒,双酶切获得目的基因,插入原核表达质粒pET28a,重组子双酶切、PCR和测序鉴定,转化大肠杆菌BL21并以IPTG诱导表达.结果 从弓形虫RH株cDNA中扩增出693 bp的HXGPRT基因片段;含pET28a/HXGPRT的宿主菌经诱导后,获得与预期分子量相符的表达产物,Western blotting提示重组蛋白能够被弓形虫患者血清中的IgG抗体识别,获得纯化的重组蛋白.结论 成功地从弓形虫RH株基因组DNA中获取HXGPRT基因,构建pET28a/HXGPRT重组质粒,并高效表达,为进一步研究提供了条件.