成体兔次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因的打靶研究

• 作者: 丁雷 姚刚 张传山 王伟 谷瑞环 郭毅 陈学进
• 来源期刊: 实验动物与比较医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 基因敲除 兔成纤维体细胞 次黄嘌吟-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 细胞筛选
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 233-240
• 分类号: Q95-33
• 字数: 5114字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2010.04.001

摘要

目的 构建兔HPRT基因打靶载体.方法 在已经筛选到含有兔全长次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(Hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase,HGPRT)基因BAC克隆(LBNL1304M19)的基础上,利用Red重组系统,从此克隆上将一段12.5 kb无启动子的HGPRT基因组片段克隆到pKS-质粒上,产生pKS-HGPRT质粒.然后基于pKS-HGPRT和pEGFP-C1-SD1211质粒,构建了含有绿色荧光蛋白(GFP)及新霉素(neo)筛选标记基因的打靶载体pKS-HGPRT-neo.结果 将线性化的打靶载体通过脂质体转染的方法整合到成体兔成纤维细胞基因组中,利用G418及6-TG进行细胞克隆的抗药物筛选,共得到抗性细胞克隆20个.对细胞克隆进行PCR及测序初步鉴定,获得8个发生同源重组的细胞克隆,还需利用Southern blotting做进一步验证.结论 成功快速地构建了HPRT基因敲除型打靶载体,为下一步进行体细胞核移植制备HGPRT基因敲除转基因克隆兔奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姚刚	新疆农业大学动物医学学院	141	547	13.0	17.0
2	王伟	新疆农业大学动物医学学院	61	329	10.0	15.0
3	陈学进	上海交通大学医学院实验动物科学部	46	180	7.0	10.0
4	谷瑞环	上海交通大学医学院实验动物科学部	17	39	5.0	5.0
5	张传山	新疆医科大学一附院医学研究中心新疆包虫病基础医学重点实验室	22	15	2.0	3.0
6	郭毅	上海交通大学医学院实验动物科学部	4	4	2.0	2.0
7	丁雷	东北林业大学野生动物资源学院	7	57	3.0	7.0