miR-496过表达抑制结肠癌细胞生长和转移

• 作者: 刘丽 周静怡 王娟 钟冰
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 结肠癌 miR-496 Wnt/β-catenin 细胞活力
• 年，卷（期）: 2016,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1815-1823
• 页数: 9页
• 分类号: R730.23
• 字数: 5277字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2016.10.013

摘要

目的：研究miR-496过表达对结肠癌细胞生长和转移的影响及其分子机制。方法：运用生物信息学软件筛选miR-496靶向相互作用蛋白；real-time PCR和Western blot 法测定结肠癌细胞系HT29、HCT116、SW480以及正常结肠上皮细胞NCM460中miR-496、CTNNB1 mRNA和β-catenin蛋白的表达；运用Lipofectamine 2000将miR-496 mimics转染HT29、HCT116和SW480细胞，分别命名为HT29-miR-496 mimics、HCT116-miR-496 mimics和SW480-miR-496 mimics细胞，转染scramble为阴性对照；运用MTT法、乳酸脱氢酶（ LDH）试剂盒法、克隆形成实验和Transwell分别测定细胞活力、LDH漏出率、克隆形成能力和转移能力；萤光素酶报告基因实验测定miR-496启动子活性；Western blot法测定β-catenin、真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1（4E-BP1）、p-4E-BP1、低密度脂蛋白受体相关蛋白6（LRP6）、p-LRP6、MMP-7、MMP-9、MMP-13以及TIMP-2的蛋白水平。结果：miR-496与β-catenin内源性相互作用；miR-496在HT29、HCT116和SW480细胞中低表达，而在NCM460高表达；β-catenin在HT29、HCT116和SW480细胞中高表达，而在NCM460低表达；培养24 h、48 h、72 h、96 h的HT29-miR-496 mimics、HCT116-miR-496 mimics和SW480-miR-496 mimics细胞活力、LDH漏出率、克隆形成率和转移的细胞数均显著低于对照组（ P＜0.05）；萤光素酶报告基因实验结果显示转染miR-496 mimics细胞中的miR-496启动子活性明显增加（P＜0.05），分别是对照组的1.75倍、2.04倍和1.61倍。 Western blot实验结果显示miR-496过表达抑制β-catenin蛋白表达， p-4E-BP1和p-LRP6的蛋白水平降低；siRNA或miR-496过表达介导的β-catenin 表达下调能显著抑制MMP-7和MMP-9的表达，促进TIMP-2的表达。结论：miR-496在结肠癌细胞中低表达，在正常结肠上皮细胞中高表达；miR-496过表达抑制结肠癌细胞的生长和转移，其机制是通过抑制Wnt／β-catenin通路进一步抑制MMP-7和MMP-9表达，促进TIMP-2表达，从而抑制结肠癌细胞的恶性表型。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钟冰	济南市第五人民医院消化科	7	16	2.0	4.0
2	刘丽	济南市第五人民医院消化科	3	4	2.0	2.0
3	周静怡	济南市第五人民医院消化科	6	56	3.0	6.0
4	王娟	济南市第五人民医院消化科	1	2	1.0	1.0