血清中外泌体及外泌体 RNA 提取方法的比较

• 作者: 唐月汀 安泰学 徐咏 覃思华 郑磊 黄依瑶
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 关键词: 外泌体 微RNAs 超速离心法
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 427-432
• 页数: 6页
• 字数: 5466字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2016.06.008

摘要

目的：评价超高速离心法、ExoQuick 与TEI试剂盒提取血清中外泌体的价值。方法方法学比较。收集2015年8至11月南方医科大学南方医院检验科健康者3名，采集静脉血至采血管，4℃静置12 h使其自然凝固后离心取上清液为血清，采用超高速离心法、ExoQuick与TEI试剂盒提取血清中外泌体，通过透射电子显微镜、蛋白印迹技术和NTA颗粒粒度分析仪检测外泌体形态结构、蛋白表达量和浓度与粒径分布，评估外泌体提取效率；采用超高速离心法＋Trizol LS法、ExoQuick＋SeraMir、TEI＋TER与ExoRNeasy 试剂盒提取法分离3例血清中外泌体总RNA（exo－RNA），利用Agilent生物分析仪分析RNA片段分布，实时荧光定量PCR仪检测miRNA表达水平。组间蛋白浓度与miRNA表达量的比较采用方差分析。结果外泌体提取方法中，比较外泌体浓度和其蛋白浓度， ExoQuick与TEI试剂盒提取浓度高于超高速离心法；超高速离心法提取外泌体同时表达CD9、CD63和TSG101蛋白，而ExoQuick与TEI试剂盒提取外泌体仅表达TSG101。外泌体RNA提取方法中，不同方法影响RNA片段分布和miRNA表达，未影响 miRNA相对表达趋势；ExoRNeasy提取RNA条带浓度较高，各miRNA表达水平较高；TEI＋TER法未见明显RNA条带，样本中各miRNA表达水平稳定；超高速离心法＋Trizol LS法与ExoQuick＋SeraMir法提取RNA可见范围较广的低浓度条带，此两法提取RNA中各miRNA表达无明显规律。结论外泌体提取方法中传统超高速离心法适用于蛋白组学方面研究，而ExoQuick与TEI试剂盒提取方法适用于血清等稀缺样本外泌体制备。（中华检验医学杂志，2016，39：427－432）