鸭坦布苏病毒鸡胚弱化毒株的选育

• 作者: 于可响 凌红丽 刘存霞 李玉峰 胡峰 袁小远 马秀丽 黄兵
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 鸭坦布苏病毒 鸡胚 弱化 活疫苗
• 年，卷（期）: 2016,（14）
• 所属期刊栏目: 专题:水禽传染病
• 页码范围: 2822-2829
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.14.016

摘要

[目的]将鸭坦布苏病毒BZ_2010株在SPF鸡胚上进行连续传代致弱,旨在选育安全性高、免疫原性好的活疫苗候选毒株.[方法]以SPF鸡胚为增殖宿主,将BZ_2010株连续传代,直至第120代,以1日龄雏鸭和30周龄的产蛋种鸭为试验对象,对第120代次毒株(命名为VC2)的安全性进行评价;以1d雏鸭为试验对象,对VC2株的返强情况进行评价;以18周龄的种鸭为试验对象,对VC2株免疫后的中和抗体进行监测;以25周龄的种鸭为试验对象,对VC2株免疫后的保护效果进行评价;利用RT-PCR方法分别扩增BZ_2010株和VC2株的E基因和NS4A基因,进行测序分析.[结果]传代病毒对鸡胚的平均死亡时间逐渐缩短,而病毒毒价有逐渐提高的趋势,ELD50由第20代的10-5 3/0.1mL提高到第120代的1 0-5.8/0.1mL,而且第80代之前提高较快,后期基本稳定.将VC2株通过颈部皮下接种1d雏鸭和肌肉接种30周龄产蛋种鸭,接种后试验鸭无异常临床表现,肝脏也无明显病理变化,这说明VC2株具有良好的安全性.将VC2在1d雏鸭进行连续5次传代,未发现试验鸭有任何异常症状,将第5代组织悬液接种1d雏鸭,采集肝脏进行病理切片观察,发现无明显病理变化,这说明VC2株具有良好的稳定性.基因测序分析结果显示,VC2株E蛋白的第86、157、189、301和312位氨基酸发生改变,而NS4A蛋白只有一个氨基酸发生突变,即第54位氨基酸由F变为L.VC2免疫种鸭后抗体水平上升很快,第4周即可达到高峰,并且维持较长时间;VC2免疫后于第2周和第50周利用强毒株进行攻毒试验,结果VC2免疫组在攻毒后未出现异常症状,粪便正常,产蛋率保持正常,这说明VC2株免疫可对强毒株的攻击产生完全保护.[结论]通过鸡胚连续传代成功获得了一株安全性高、免疫原性好的鸭坦布苏病毒鸡胚弱化毒株.VC2免疫种鸭后抗体水平上升很快,可维持较长时间.攻毒试验结果表明,VC2株免疫可对强毒株的攻击产生完全保护.