人EBI3蛋白及其突变体的表达及定位研究

• 作者: 刘晓颖 刘泽宇 姚亮 潘林鑫 耿慧武 范礼斌 邓欢欢 邢雪梅
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: EBI3 质粒构建 Western blot 免疫荧光
• 年，卷（期）: 2016,（11）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 1573-1578
• 页数: 6页
• 分类号: Q28|R392.6
• 字数: 4708字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2016.11.005

摘要

目的：研究人EB病毒诱导的基因3(EBI3)及其突变体在哺乳动物细胞中的表达及定位差异及其原因。方法基于NCBI 数据库中人EBI3氨基酸的序列分析,利用分子克隆技术构建人EBI3真核表达质粒pcDNA3．1-EBI3-FLAG、单独包含氨基端或羧基端Ⅲ型纤连蛋白(FN3)结构域的缺失突变体的表达质粒pcDNA3．1-EBI3(1~135)-FLAG 和 pcDNA3．1-EBI3(125~230)-FLAG 以及第210位天冬氨酸(Asp)点突变体Asp210的表达质粒pcDNA3．1-EBI3-D210AFLAG； Western blot 方法检测EBI3及其突变体在HEK 293T 细胞中的表达；免疫荧光实验观察人EBI3及各突变体在 COS7细胞中的定位。结果成功构建了下游携带FLAG 标签的人EBI3及其突变体的真核表达质粒；Western blot 结果显示重组蛋白均能在HEK 293T 细胞中稳定表达；经激光共聚焦显微镜观察,EBI3及其缺失突变体在COS7细胞的表达位置发生明显变化。结论人EBI3及其突变体真核表达质粒均能在HEK 293T、COS7细胞中成功表达；人EBI3缺失突变体在COS7细胞中的定位发生明显变化,氨基端结构域可能在EBI3蛋白的正确定位中发挥重要作用；EBI3蛋白的第210位Asp 的突变影响了其在细胞内的定位。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	耿慧武	安徽医科大学生命科学学院生物学系	17	37	3.0	5.0
2	刘晓颖	安徽医科大学生命科学学院生物学系	57	121	6.0	8.0
3	刘泽宇	安徽医科大学生命科学学院生物学系	2	1	1.0	1.0
4	潘林鑫	安徽医科大学生命科学学院生物学系	19	40	3.0	5.0
5	邢雪梅	安徽医科大学生命科学学院生物学系	1	1	1.0	1.0
6	姚亮	安徽医科大学生命科学学院	1	1	1.0	1.0
7	邓欢欢	安徽医科大学生命科学学院	1	1	1.0	1.0