检测产志贺毒素大肠杆菌抗体的间接ELISA试剂盒的研制

• 作者: 何孔旺 倪艳秀 周俊明 张强 张碧成 张雪寒 李彬 汪伟 温立斌
• 来源期刊: 西南农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 致病性大肠杆菌 紧密素 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2016,（11）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水蚕·资源昆虫
• 页码范围: 2738-2745
• 页数: 8页
• 分类号: S852.61
• 字数: 7749字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16213/j.cnki.scjas.2016.11.042

摘要

本研究旨在研制一种以紧密素为检测靶标的间接ELISA技术,检测血清中产志贺毒素大肠杆菌(Shiga toxigenic Escherichia coli,STEC)的抗体水平.根据紧密素27个亚型的N端保守序列,体外表达390～543aa片段制备包被抗原,通过敏感性、特异性、重复性和稳定性实验,建立检测STEC的抗体的间接EIISA方法.经优化筛选的间接ELISA最佳反应条件:抗原包被浓度3 ng/ 孔,待检血清稀释比例1∶200,HRP-兔抗羊IgG、HRP-兔抗牛IgG的工作浓度均为1∶15000,5％脱脂奶封闭lh,底物作用时间10min,用于牛、羊疫苗抗体检测或者STEC大肠杆菌感染的监测.