甲氨蝶呤通过内质网应激途径预防膝关节粘连

• 作者: 何俊 孙钰 戴纪杭 朱耿耀 李小磊 梁远 王静成 赵帅 陈辉 颜连启
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 组织构建 组织工程 瘢痕粘连 甲氨蝶呤 内质网应激 细胞凋亡 国家自然科学基金
• 年，卷（期）: 2016,（24）
• 所属期刊栏目: 技术与方法 -- 组织构建基础实验
• 页码范围: 3615-3620
• 页数: 6页
• 分类号: R318
• 字数: 4603字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.24.018

摘要

背景：目前膝关节瘢痕粘连的病理学机制尚不明确，多数学者认为成纤维细胞过度增殖是膝关节瘢痕粘连的主要原因。目的：观察甲氨蝶呤通过内质网应激诱导成纤维细胞凋亡及其预防膝关节粘连的作用。方法：①体外培养成纤维细胞，以10-5-10-9mol/L的甲氨蝶呤处理，加入PBS作为空白对照，24 h后检测成纤维细胞的活力变化， Hoechst33342染色观察甲氨蝶呤处理对成纤维细胞凋亡的影响。Western-blot检测内质网应激和凋亡相关蛋白cleaved PARP，CHOP，Bcl-2，Bax表达情况。②制备膝关节粘连模型，18只健康雄性新西兰大白兔随机分为3组，局部应用不同质量浓度的甲氨蝶呤，分别为2 g/L组、1 g/L组和生理盐水对照组，观察其预防膝关节粘连的效果和瘢痕组织中CHOP的表达情况。结果与结论：①甲氨蝶呤能有效抑制成纤维细胞的增殖和活力，呈现出明显的浓度依赖的趋势；②Hoechst染色发现甲氨蝶呤处理组的凋亡细胞明显多于对照组；③Western-blot 检测显示甲氨蝶呤处理后的成纤维细胞随着时间延长，cleaved-PARP表达及CHOP、bax的表达量升高，bcl-2的表达量降低。④动物实验结果显示甲氨蝶呤能有效预防兔膝关节瘢痕粘连，2 g/L组的效果优于1 g/L甲氨蝶呤组，甲氨蝶呤处理组的瘢痕中CHOP的表达量明显高于对照组，而2 g/L甲氨蝶呤组的CHOP表达量也高于1 g/L甲氨蝶呤组。⑤结果说明，甲氨蝶呤能通过内质网应激诱导成纤维细胞凋亡，预防兔膝关节瘢痕粘连。