猪APP rOmpP2诱导小鼠抗攻击感染的免疫保护力研究

• 作者: 唐昭山 张宇航 杨婷婷 胡佩佩 黄复深
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 胸膜肺炎放线杆菌(APP) 重组外膜蛋白2(rOmpP2) 免疫保护效果
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 299-306
• 页数: 8页
• 分类号: S852
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2017.02.015

摘要

猪传染性胸膜肺炎(porcine contagious pleuropneumoni,PCP)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)感染猪(Sus scrofa)引起的一种接触性呼吸道疾病,是世界养猪业的五大疫病之一.为检测猪APP重组外膜蛋白P2 (recombinant outer membrane protein P2,rOmpP2)的免疫保护作用,本研究根据GenBank中已报道的APP OmpP2基因序列设计引物对,以APP的基因组为模板PCR扩增OmpP2,测序后在NCBI登录(登录号:KM357903),并进行生物信息学分析,该基因由1 131 bp组成,编码一个含376个氨基酸的蛋白质,为一外膜孔道蛋白,该编码蛋白在APP不同的血清型之间具有很高同源性.将rOmpP2亚克隆至pET32a(+)载体,转化大肠杆菌(Escherichia coli) BL21 (DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达APP rOmpP2蛋白,经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测以及Western blot鉴定,结果表明,在42 kD处出现特异性条带,重组菌表达的rOmpP2能够被相应的阳性血清识别.动物保护实验采用BALB/c小鼠(Mus musculus)进行,免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)抗体滴度采用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测.结果表明,铝佐剂+50μg rOmpP2、铝佐剂+30 μg rOmP2及铝佐剂+10 μg rOmpP2组中,小鼠的存活率分别为50％,30％和10％,佐剂组和生理盐水对照组全部死亡,存活小鼠精神状况慢慢恢复正常,并采食.rOmpP2皮下免疫注射可诱导小鼠产生免疫应答和较高的抗攻击感染的免疫保护力.研究结果为进一步筛选猪传染性胸膜肺炎分子疫苗提供了基础资料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄复深	湖南农业大学动物医学院	44	170	8.0	11.0
2	唐昭山	湖南农业大学动物医学院	8	18	3.0	4.0
3	张宇航	湖南农业大学动物医学院	4	5	2.0	2.0
4	胡佩佩	湖南农业大学动物医学院	4	38	3.0	4.0
5	杨婷婷	湖南农业大学动物医学院	3	5	2.0	2.0