重组猪胸膜肺炎放线杆菌NLPI蛋白诱导小鼠抗攻击感染的免疫保护力研究

• 作者: 张宇航 张雨龙 李宏 杨婷婷 黄复深
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 猪胸膜肺炎放线杆菌 重组NLPI蛋白(rNLPI) 免疫保护效果 小鼠
• 年，卷（期）: 2018,（8）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1392-1400
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2018.08.012

摘要

猪传染性胸膜肺炎(porcine comagious pleuropneumonia,PCP)是猪(Sus scrofa)的一种呼吸道疾病,影响世界养猪业,其病原菌为猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP),现有疫苗由于保护效果不甚理想,因此有必要寻找新的疫苗候选分子.本研究检测了猪APP重组NLPI蛋白(recombinant NLPI,rNLPI)的免疫保护作用.根据GenBank中已报道的APP nlpi基因序列设计引物对,然后以APP的基因组为模板PCR扩增nlpi基因,测序后进行生物信息学分析,发现该基因(GenBank No.:MH027649)由900 bp组成,编码1个含299个氨基酸的蛋白质,为一外膜脂蛋白,此外膜蛋白在多种APP血清型之间具有很高同源性.将nlpi基因亚克隆至pET32a(+)载体,转化大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropy1β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达APP rNLPI,并经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blot,WB)确认.结果表明,在34 kD处有特异性条带,可被相应的阳性血清识别.动物保护实验采用BALB/c小鼠(Mus musculus)进行,酶联免疫吸附法(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)用于测定免疫球蛋G(immunoglobulin G,IgG)抗体滴度.结果表明,弗氏不完全佐剂+50 μg rNLPI、弗氏不完全佐剂+30 μgrNLPI、弗氏不完全佐剂+10 μg rNLPI、30 μg rNLPI免疫后,可诱导小鼠分别产生40％、20％、10％和20％的存活率;佐剂组和生理盐水对照组存活率为0.幸存小鼠慢慢恢复健康,并正常采食.可见,rNLPI皮下免疫可诱导小鼠产生免疫应答和较高的抗攻击感染的免疫保护力.该研究结果为进一步筛选猪传染性胸膜肺炎分子疫苗积累了基础资料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄复深	湖南农业大学动物医学院	44	170	8.0	11.0
5	张宇航	湖南农业大学动物医学院	4	5	2.0	2.0
6	杨婷婷	湖南农业大学动物医学院	3	5	2.0	2.0
7	张雨龙	湖南农业大学动物医学院	2	2	1.0	1.0
8	李宏	湖南农业大学动物医学院	1	2	1.0	1.0