水貂中大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌和不动杆菌三重荧光PCR方法的建立

• 作者: 尹斐斐 王贵升 王金宝 田夫林
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 大肠杆菌 肺炎克雷伯氏菌 不动杆菌 荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 技术支撑
• 页码范围: 96-100
• 页数: 5页
• 分类号: S851.3
• 字数: 3617字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2017.02.028

摘要

依据GenBank中大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌和不动杆菌的部分已知序列,选取大肠杆菌的uidA基因、肺炎克雷伯氏菌的khe基因和不动杆菌的secE基因,利用Primer Premier 5设计引物,选出扩增序列的3对引物及相应的Taqman探针,uidA、khe、secE探针5'端分别标记FAM、HEX、CY5荧光发射基因,3'端标记BHQ1淬灭荧光基因.通过优化反应条件,建立一种同时检测大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌和不动杆菌的诊断方法.特异性和敏感性试验显示,该方法能特异地检测大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌和不动杆菌,其最低检测限分别为2×10-1CFU/μL、9.2×10-1CFU/μL和4.3×10-1 CFU/μL.整个检测扩增在2小时内完成.该结果表明本试验所建立的三重荧光定量PCR方法的灵敏度、重复性及特异性均较好,可用于同时快速检测三种病原菌.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	田夫林		22	151	7.0	11.0
2	王贵升	山东大学生命科学学院	25	57	5.0	6.0
6	尹斐斐		4	15	2.0	3.0
7	王金宝	山东大学生命科学学院	1	5	1.0	1.0