人釉原蛋白亮氨酸富集片段的冷冻电子显微镜观察及其引导矿化性能研究

• 作者: 任小华 冯小云 廖楚航 杜芹 田鲲
• 来源期刊: 华西口腔医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 冷冻电子显微镜 釉原蛋白 釉原蛋白亮氨酸富集片段 羟磷灰石
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 63-67
• 页数: 5页
• 分类号: R783
• 字数: 3500字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7518/hxkq.2017.01.009

摘要

目的：采用冷冻电子显微镜观察体外重组的人釉原蛋白富亮氨酸片段（LRAP），分析其细微结构和聚集状态，结合矿化实验评估LRAP体外引导羟磷灰石生长的定向成核能力。方法人工合成LRAP基因，与原核表达载体pCold-SUMO行质粒构建，于宿主菌大肠杆菌BL21plys中诱导表达并纯化，在冷冻电子显微镜下观察LRAP在pH值从3.5到8.0的环境中聚合自组装的过程，并在人工唾液中通过透射电镜观察羟磷灰石晶体的生长规律。结果通过原核表达成功得到纯度90%以上的LRAP蛋白提取物，当pH值为8.0时，LRAP能聚集成多聚体和纳米小球等功能结构，在人工唾液中能诱导羟磷灰石晶体生长成熟。结论作为简化的釉原蛋白功能域，LRAP兼备了自组装为纳米小球和c轴诱导晶体矿化的特性，可作为运用釉基质蛋白多聚物行无细胞修复牙体硬组织缺损的备选材料之一。