诊断试剂用己糖激酶的制备工艺研究

• 作者: 刘春卯 吴芳彤 曹倩荣 罗同阳 胡美荣 郑翔
• 来源期刊: 河北农业大学学报
• 关键词: 己糖激酶HK 大肠杆菌 诊断试剂 正交试验
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 页码范围: 66-70,86
• 页数: 6页
• 分类号: Q814
• 语种: 中文
• DOI: 10.13320/j.cnki.jauh.2017.0012

摘要

为获得微生物工程菌株来源的己糖激酶(Hexokinase,HK)并提高HK的发酵水平,对已构建产HK的大肠工程菌株BW25113-pYBE/schk进行发酵工艺优化,为HK法血糖检测试剂盒的配制提供技术支撑.本研究采用正交试验对菌株发酵工艺进行优化,并对超声破壁获取粗酶及粗酶的纯化工艺进行研究.结果表明:工程菌株BW25113-pYBE/schk的最佳发酵培养条件为:装液量80mL/500mL,发酵液初始pH6.5,发酵温度37℃,接种量2％,诱导剂添加时间为接种后1h,转速180 r/min.超声破壁最佳工艺为:功率200W,工作1.5s间歇1 s,破壁5 min.在最佳发酵和破壁工艺条件下,HK的发酵活力稳定在157 U/mL,经过Ni-Agarose His标签蛋白试剂纯化获得60 kD的HK.本研究建立了高产己糖激酶大肠杆菌工程菌株的发酵工艺,有利于降低己糖激酶法血糖试剂盒的成本,为糖尿病患者的准确诊断及普及提供便利条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡美荣	中国科学院微生物研究所微生物生理与代谢工程重点实验室	12	54	5.0	6.0
2	罗同阳	河北省微生物研究所检测中心	11	33	4.0	5.0
3	郑翔	河北省微生物研究所酶工程室	11	26	3.0	4.0
4	吴芳彤	河北省微生物研究所酶工程室	7	24	3.0	4.0
5	刘春卯	河北省微生物研究所酶工程室	8	20	3.0	4.0
6	曹倩荣	河北省微生物研究所酶工程室	5	14	2.0	3.0