运用DOE方法降低抗体生产过程中五聚甘露糖水平的工艺开发

• 作者: 周新华 徐水清 徐菲菲 杨玲 沈俊 王太海
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 工学
• 关键词: 抗体生产 细胞培养 生物反应器 高甘露糖 工艺优化 试验设计
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 305-309
• 页数: 5页
• 分类号: TQ460.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.19526/j.cnki.1005-8915.20170405

摘要

通过试验设计(DOE)方法和JMP软件分析快速优化重组CHO细胞在生物反应器中的培养工艺,保证抗体高表达量的同时降低五聚甘露糖(Man5)水平.以培养基CD-CIM1为基础培养基,在细胞培养过程中添加补料培养基流加培养,利用3L小型生物反应器,对反应器pH值,溶氧(DO),温度(T)3个控制参数进行3因子2水平比较,以抗体表达量(Titer)、产物蛋白Man5水平为响应变量,应用JMP软件进行拟合模型最小二乘法分析,找出最优工艺参数.用优化的工艺参数进行验证,并且放大到50 L生物反应器中,先后培养两个批次,进一步验证优化结果.通过分析,参数T、pH值及3因素间两两交互作用对Titer均有显著影响,DO对Titer影响不显著;pH对Man5有显著影响,T、DO及3因素间两两交互作用对Man5的影响均不显著.结果预测,为获得高表达量及可接受范围(O％～10％)内的Mad水平,最优工艺参数为pH7.10,DO 60％,T34.5℃.用优化工艺在小型生物反应器内进行验证,收获时抗体表达量分别为1 152,901 mg/L;Man5水平分别为8.60％,7.49％;两个批次的50 L生物反应器放大培养,抗体表达量分别为840,849 mg/L,Man5水平分别为6.03％,9.45％,结果均符合预期.成功运用DOE方法快速高效的建立了降低Man5水平的细胞培养工艺,为后期放大提供依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐菲菲		1	0	0.0	0.0
2	王太海		1	0	0.0	0.0
3	杨玲		1	0	0.0	0.0
4	沈俊		1	0	0.0	0.0
5	徐水清		2	1	1.0	1.0
6	周新华		1	0	0.0	0.0