循环酶法同型半胱氨酸检测关键酶CBS和CBL的开发及试剂盒研制初探

• 作者: 刘虹均 卢大儒 廖远平 朱化星 李德彬 沈云龙 王笃强 陈帅
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 胱硫醚β-合成酶 胱硫醚β-裂解酶 同型半胱氨酸 酶活测定
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 81-87
• 页数: 7页
• 分类号: Q819
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20170212

摘要

以酿酒酵母基因组为模板通过PCR分别扩增胱硫醚β合成酶(cystathionine β-synthase, CBS)和胱硫醚β-裂解酶(cystathionineβ-lyase,CBL)目的基因片段,经无缝克隆构建表达质粒并转化大肠杆菌菌株E.coli BI21(DE3).经诱导表达和纯化后,重组蛋白的纯度均达到90％,回收率均达到80％,可溶表达量分别为26 mg/L和332 mg/L.经催化活性测定,CBS的单位酶活为15 U/mg,CBL的单位酶活为72 U/rg.在此基础上初步开发了循环酶法同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)检测试剂盒,实验结果证明该试剂盒的有效性和稳定性均符合体外诊断检测的要求,其检测性能与市售进口同类试剂盒基本一致.