菖蒲芋螺不同大小基因组DNA片段的分离制备

• 作者: 丁青 刘月鹏 吴科榜 朱晓鹏 罗素兰 长孙东亭
• 来源期刊: 热带生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 菖蒲芋螺 基因组DNA提取方法 基因组DNA片段 分离制备 脉冲场电泳
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 267-276
• 页数: 10页
• 分类号: Q33
• 字数: 8331字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15886/j.cnki.rdswxb.2017.03.004

摘要

使用常规酚/氯仿抽提法(CTAB法)、离心柱法和磁珠吸附法,分别从菖蒲芋螺毒腺、肌肉及肝胰脏中提取基因组DNA,利用普通琼脂糖凝胶电泳与脉冲场电泳(PFGE)对基因组DNA片段进行分离,并检测提取DNA的大小和分布范围,同时,对脉冲场电泳条件进行了优化.结果表明,3种方法均可提取基因组DNA,其中CTAB法和离心柱法提取的毒腺DNA纯度高,产率大,可用于后续实验,而磁珠法产率适中且纯度不高,但离心柱法的DNA片段较小,大多在9 kb以下,而CTAB法提取的DNA片段较大,获得的20 kb以上的大片段量较多,更适合于大片段基因组文库的构建.3种芋螺组织中,肝胰脏产率最高但片段弥散有降解,毒腺DNA片段较大且集中,产率也较高,丽肌肉的DNA片段产率最低且片段较小.因此,用CTAB法提取菖蒲芋螺毒腺的DNA更适合构建大片段基因组DNA文库.筛选高质量的菖蒲芋螺的DNA,利用优化的脉冲场电泳条件进行分离回收,获得了不同大小片段的DNA,为后续菖蒲芋螺不同载体系统的基因组文库构建奠定了基础.