高通量PCR模板植物基因组DNA制备方法

• 作者: 刘耀光 初志战 李日清 王慧娜 马兴亮
• 来源期刊: 作物学报
• 关键词: 基因组DNA制备 PCR 基因分型
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
• 页码范围: 1200-1205
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1006.2013.01200

摘要

制备大量生物样品的模板DNA用于PCR检测是费时费工的工作.本文介绍一种快速高通量的植物基因组DNA (gDNA)制备及其用于PCR基因型检测的操作方法.将一小段单子叶植物苗叶片(与96方孔板的孔深大致相同)或一小块(约2～5 mg)双子叶植物叶片放入96方孔板的各孔中、放入一粒直径4 mm或3 mm的合金珠和150 μL制备缓冲液,盖上硅橡胶盖,在涡旋器或震动研磨器震动2～4 min破碎组织.此方法获得的粗制gDNA样品浓度约2～4 ngμL-1.用96针复制器或多通道移液器转移约0.5～1.0 μL的gDNA溶液到96孔PCR板的反应液中,利用各种类型的PCR标记(简单序列重复SSR,插入缺失InDel等)进行基因型检测.此方法制备的gDNA模板也适合于较大DNA片段(＞1 kb)的扩增.本方法的关键是控制好在一定溶液量中破碎合适量的叶片,以及不要加入过量的gDNA溶液,以免带入过多的杂质抑制PCR效果.这种从材料种植、制备gDNA、转移样品gDNA,到PCR都是96格式化操作的快速、高通量、低成本的方法特别适合大量植物样品的规模化基因型检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘耀光	亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室/华南农业大学生命科学学院	2	50	2.0	2.0