低浓度胰蛋白酶原代培养大鼠血管内皮细胞实验方法研究

• 作者: 刘雅珺 吴磊 李莉萍 杨树龙 杨蓓 洪芬芳 苏湾英 邵亚兰 郭发先 魏志萍
• 来源期刊: 药物资讯
• 学科: 医学
• 关键词: 血管内皮细胞 原代细胞培养 胰蛋白酶 方法学 大鼠
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 页码范围: 108-114
• 页数: 7页
• 分类号: R73

摘要

目的:探索改进一种简单、经济和高纯度的大鼠血管内皮细胞分离培养方法。方法:采用2%戊巴比妥钠麻醉Wistar大鼠,在无菌条件下截取主动脉约3~4 cm,再将主动脉血管外翻使内膜暴露,用丝线结扎动脉两端,以0.125%胰蛋白酶消化18~20 min,在倒置相差显微镜下直接观察细胞生长和细胞形态特征,分别应用免疫组化和免疫荧光方法检测第VIII因子相关抗原抗体结合情况,对培养传代的血管内皮细胞进行鉴定。结果:采用0.125%胰蛋白酶直接消化可获得高纯度的大鼠主动脉血管内皮细胞。经过3~4天培养,细胞呈集落样散在分布于六孔培养板底,到10~12天时,细胞贴壁增长至覆盖大部分培养板底,约85%的细胞汇合成单层,呈现典型的“鹅卵石”样内皮细胞特征;此外,免疫组化和免疫荧光方法检测第VIII因子相关抗原抗体结合情况,发现大多数细胞胞浆呈现棕黄色和绿色荧光的阳性反应,显示分离培养的细胞主要是血管内皮细胞。结论:本改良的细胞培养方法操作简便,只需浓度低至0.125%胰蛋白酶即可获取较高纯度的血管内皮细胞,不需要较昂贵的胶原酶及内皮细胞生长因子,与现有的其他培养方法相比更为经济实用。