下调大鼠血管内皮细胞血管紧张素转换酶的实验研究

• 作者: 周华 张翠芳 陈瑞瑞 高奋
• 来源期刊: 中西医结合心脑血管病杂志
• 关键词: 基因干扰 内皮细胞 血管紧张素转换酶
• 年，卷（期）: 2018,（7）
• 所属期刊栏目: 基础医学论著/研究
• 页码范围: 859-864
• 页数: 6页
• 分类号: R329.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.12102/j.issn.1672-1349.2018.07.008

摘要

目的 构建腺病毒载体使其携带血管紧张素转换酶(ACE)基因短发夹RNA(shRNA),通过RNA干扰技术选择性地下调大鼠血管内皮细胞(ECs)ACE表达.方法 采用RT-PCR法从之前构建的真核表达载体p ACE-shRNA中扩增ACE-shRNA片段,扩增之后将ACE-shRNA片段克隆进pDC316穿梭质粒,再将293细胞被构建好的pDC316-ACE-shRNA穿梭质粒载体和pBH-Glox-E1,3Cre骨架病毒转染,进行病毒颗粒包装重组并进行滴度测定和纯化.随后进行原代培养大鼠血管ECs转染,通过实时荧光定量PCR法分别在转染前及转染后24 h、48 h、72 h通过实时荧光定量PCR法来检测ACE mRNA的表达.结果 高滴度的重组病毒被制备完成,携带ACE-shRNA的重组腺病毒载体经PCR检测、限制性内切酶和GFP表达证实构建成功,被转染24 h时大鼠血管ECsACE mRNA表达无统计学意义变化;但被转染48h时,ECsACE mRNA表达差异有统计学意义(P＜0.05);被转染后72h时表达更低.结论 实验成功构建重组腺病毒栽体并携带ACE-shRNA片段,同时证实shRNA可选择性下调原代培养大鼠血管ECs上ACE表达,可能为心血管病基因治疗和应用提供新思路.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周华		20	40	3.0	6.0
2	高奋		56	271	8.0	14.0
3	张翠芳		5	7	2.0	2.0
4	陈瑞瑞		6	6	2.0	2.0