下调大鼠血管平滑肌细胞血管紧张素转换酶的表达

• 作者: 周华 张翠芳 杨志明 陈瑞瑞 高奋
• 来源期刊: 中西医结合心脑血管病杂志
• 关键词: RNA干扰 平滑肌细胞 血管紧张素转换酶
• 年，卷（期）: 2017,（22）
• 所属期刊栏目: 基础医学论著/研究
• 页码范围: 2821-2826
• 页数: 6页
• 分类号: R329
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-1349.2017.22.007

摘要

目的 构建腺病毒载体使其携带血管紧张素转换酶(ACE)基因短发夹RNA(shRNA),观察选择性下调大鼠血管平滑肌细胞ACE表达.方法 从之前构建的真核表达载体p-ACE-shRNA中扩增ACE-shRNA片段,采用RT-PCR法并克隆进穿梭质粒pDC316中,将构建好的pDC316-ACE-shRNA穿梭质粒载体和pBHGlox-E1,3Cre骨架病毒共转染293细胞,进行病毒颗粒包装重组、滴度测定和纯化.随后进行原代培养大鼠血管平滑肌细胞转染,通过实时荧光定量PCR分别在转柒前及转染后24h、48h、72 h检测ACE mRNA的表达.结果 经PCR检测证实携带ACE-shRNA重组腺病毒载体构建成功并制备出了高滴度重组病毒,大鼠血管平滑肌细胞被转染后24 h,ACE mRNA表达无明显变化;被转染后48h,ACE mPNA表达显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05);被转染后72h时ACE mRNA表达更低.结论 本实验成功构建重组腺病毒载体其携带ACE-shRNA片段,同时证实shRNA可选择性下调原代培养大鼠血管平滑肌细胞上ACE表达,可能为心血管病基因治疗提供新思路.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨志明		125	423	10.0	13.0
2	周华		20	40	3.0	6.0
3	高奋		56	271	8.0	14.0
4	张翠芳		5	7	2.0	2.0
5	陈瑞瑞		6	6	2.0	2.0