β-淀粉样蛋白1-42寡聚体的制备、鉴定及其对星形胶质细胞的作用

• 作者: 吕田明 杨灿洪 麦汉滔 黄小玉 黄晓敏
• 来源期刊: 中华神经医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 阿尔茨海默病 β-淀粉样蛋白 星形胶质细胞 水通道蛋白-4
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 114-120
• 页数: 7页
• 分类号: R749.1+6
• 字数: 6185字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1671-8925.2017.02.002

摘要

目的 探讨β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)寡聚体的制备和鉴定方法,并探讨其对体外培养的小鼠星形胶质细胞的作用. 方法 (1)溶解Aβ1-42多肽后取100 μmol/L Aβ1-42多肽母液,分别经4℃孵育24 h、4℃孵育72 h、37℃孵育24 h、37℃孵育72 h处理,应用电子显微镜观察和Western blotting对不同孵育条件制备的Aβ1-42进行鉴定.(2)将不同浓度的Aβ1-42寡聚体(由Aβ1-42多肽母液经4℃孵育24 h制备)加入到体外培养的星形胶质细胞中,采用CCK-8法检测不同浓度Aβ1-42寡聚体(0、0.1、0.5、1、5、10、50、100 μmol/L)处理后星形胶质细胞存活率的变化,采用免疫荧光染色检测不同浓度Aβ1-42寡聚体(0、1、10、50 μmol/L)处理后星形胶质细胞的形态变化,采用Western blotting检测不同浓度Aβ1-42寡聚体(0、1、10、50 μmol/L)处理后胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及水通道蛋白-4(AQP4)表达的改变. 结果 (1)Aβ1-42多肽经不同孵育条件处理后,在电子显微镜观察和Western blotting检测中分别表现出不同形态和聚合度,其中经4℃孵育24 h制备的Aβ1-42寡聚体主要呈10nm颗粒状和短丝状物质的混合体;相对分子质量10 000左右的蛋白表达量减少,相对分子质量15 000～25 000的蛋白表达量增多.(2)不同浓度Aβ1-42寡聚体刺激星形胶质细胞24 h后,CCK-8法检测结果显示,细胞存活率随着浓度增加逐渐升高,其中与0μmol/L组比较,10、50及100μmol/L Aβ1-42寡聚体组细胞存活率显著增加,差异均有统计学意义(P＜0.05);免疫荧光染色观察发现,与0 μmol/L组比较,1、10及50μmol/L Aβ142寡聚体组星形胶质细胞呈活化状态,表现为胞体增大,细胞突起增多、伸长,呈放射状,GFAP荧光强度增强;Western blotting检测结果显示,随着Aβ1-42寡聚体浓度的增加,GFAP及AQP4蛋白表达均有升高趋势,其中与0μmol/L组比较,10及50 μmol/L Aβ142寡聚体组GFAP蛋白表达均明显增多,差异均有统计学意义(P＜0.05);与0μmol/L组比较,1、10及50 μmol/L Aβ1-42寡聚体组AQP4蛋白表达均明显增多,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 100 μmol/L Aβ1-42多肽经4℃孵育24 h能够制备Aβ1-42寡聚体.Aβ1-42寡聚体能激活星形胶质细胞并上调AQP4的表达,这可能是机体的一种自我保护机制.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕田明	南方医科大学第三附属医院神经内科	48	295	9.0	14.0
2	黄小玉	南方医科大学第三附属医院神经内科	6	29	4.0	5.0
3	杨灿洪	南方医科大学第三附属医院神经内科	13	46	5.0	6.0
4	黄晓敏	南方医科大学第三附属医院神经内科	6	26	4.0	5.0
5	麦汉滔	南方医科大学第三附属医院神经内科	5	16	2.0	4.0