谷氨酰胺对过氧化氢诱导氧化应激人结肠癌HT-29细胞损伤和凋亡的影响

• 作者: 何祥祥 李开锋 杨华 桂国弘 肖英平 陈安国
• 来源期刊: 动物营养学报
• 学科: 农学
• 关键词: 谷氨酰胺 氧化损伤 细胞凋亡 HT-29细胞 过氧化氢
• 年，卷（期）: 2017,（8）
• 所属期刊栏目: 分子营养
• 页码范围: 2734-2742
• 页数: 9页
• 分类号: S811.3
• 字数: 5648字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-267x.2017.08.016

摘要

本试验旨在通过研究谷氨酰胺对过氧化氢(H2O2)诱导氧化应激人结肠癌HT-29细胞损伤和凋亡的影响,阐明谷氨酰胺的抗氧化效果和作用机理.HT-29细胞经不同浓度[0(对照组)、0.5、2.0、10.0 mmol/L]谷氨酰胺和0.35 mmol/L H2O2分别处理12、24、32 h后,测定细胞的超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,并采用荧光定量PCR方法分析谷氨酰胺对H2O2诱导的细胞凋亡相关基因的mRNA相对表达量,以及采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法对HT-29细胞染色,并用流式细胞仪检测细胞的凋亡情况.结果表明:1)处理24 h后,0.5、2.0 mmol/L Gln组SOD活性显著高于对照组(P<0.05);处理32 h后,0.5、2.0 mmol/L Gln组SOD活性显著高于对照组(P<0.05),MDA含量显著低于对照组(P<0.05).2)处理12 h后,各组天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)和B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)mRNA相对表达量无显著差异(P>0.05).与对照组比较,0.5 mmol/L Gln组核转录因子 κB(NF-κB)mRNA相对表达量显著降低(P<0.05),0.5与2.0 mmol/L Gln组B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA相对表达量显著提高(P<0.05).处理24 h后,与对照组比较,0.5、2.0和10.0 mmol/L Gln组Caspase-3、NF-κB和Bax mRNA相对表达量均显著降低(P<0.05),Bcl-2 mRNA相对表达量显著升高(P<0.05).处理32 h后,与对照组比较,2.0 mmol/L Gln组细胞表面诱导凋亡分子(FAS)、Caspase-3、NF-κB、Bax mRNA相对表达量均显著降低(P<0.05),Bcl-2 mRNA相对表达量显著升高(P<0.05);10.0 mmol/L Gln组FAS、Caspase-3、NF-κB、Bax mRNA相对表达量均显著升高(P<0.05).3)处理24 h后,与对照组比较,Gln处理使活细胞数量提高了5.32%~11.97%,坏死细胞数量降低了6.75%~12.66%.处理32 h后,与对照组比较,Gln处理使活细胞数量提高了1.39%~7.63%,坏死细胞数量降低了3.40%~4.57%.由此可见,谷氨酰胺可抑制氧化应激反应,降低H2O2诱导的HT-29细胞凋亡.