以ADP受体P2Y12为靶标的中药抗栓活性无标记细胞表型筛选

• 作者: 宁召臣 朱彦 董鹏志 谭晓文
• 来源期刊: 天津中医药大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: ADP受体 无标记 高通量
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 专家论坛
• 页码范围: 6-10
• 页数: 5页
• 分类号: R284
• 字数: 3786字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11656/j.issn.1673-9043.2017.01.02

摘要

[目的]建立二磷酸腺苷（ADP）受体P2Y12的无标记方法以高通量、低毒性地筛选中药抗血小板/血栓活性物质。[方法]应用聚乙烯亚胺（PEI）将质粒pCMV-hP2Y12-C-His转染入HEK293细胞，采用遗传霉素（G418）筛选获得稳定转染的hP2Y12-C-His-HEK293细胞系，以实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）和蛋白免疫印迹（Western Blot）的方法，分别从转录和翻译水平验证P2Y12-His的表达，采用Lable-free Enspire多功能读板机检测激动剂ADP的激动作用，以及抑制剂替卡格雷的抑制作用，以确定筛选体系的可靠性，并利用该体系筛选中药活性组分及单体共30种。[结果]经PEI转染和G418筛选获得了P2Y12-His-HEK293稳转细胞株。qRT-PCR和Western Blot结果表明P2Y12-His mRNA和蛋白表达量均显著性增加。Lable-free Enspire多功能读板机检测实验表明P2Y12受体激动剂ADP,抑制剂替卡格雷,有显著的激动及抑制作用，且具有明显的量效关系。中药组分及单体筛选结果表明，有7种组分或单体对 P2Y12受体具有良好的抑制作用。[结论]本实验成功建立了ADP受体P2Y12 Lable-free Enspire多功能读板机的无标记高通量筛选。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谭晓文	天津中医药大学天津市现代中药重点实验室	2	3	1.0	1.0
5	董鹏志	天津中医药大学天津市现代中药重点实验室	3	3	1.0	1.0
9	宁召臣	天津中医药大学天津市现代中药重点实验室	2	1	1.0	1.0