β-神经生长因子的诱导表达及其对角膜缘干细胞的作用

• 作者: 丁玲 李红 胡蓉 苏敏 高杰 黄悦
• 来源期刊: 解剖学报
• 学科: 医学
• 关键词: β-神经生长因子 Tet-on 3G四环素诱导表达系统 强力霉素 角膜缘干细胞 免疫印迹法 免疫荧光 大鼠
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 细胞和分子生物学
• 页码范围: 421-427
• 页数: 7页
• 分类号: R329.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.16098/j.issn.0529-1356.2017.04.009

摘要

目的 运用Tet-on3G四环素诱导表达系统探讨β-神经生长因子(β-NGF)在人胚肾(HEK293FT)细胞中的过表达情况及其对角膜缘于细胞(LSCs)的作用.方法 将pLVX-TRE3 G-IRES-β-NGF和pLVX-Tet3G慢病毒在空白的HEK293FT细胞进行扩增,收获慢病毒,再共转染HEK293 FT细胞,同时用不同剂量强力霉素(Dox)诱导β-NGF表达(分为未转染组、1000、100和1000 μg/L Dox诱导表达组).48 h后收集细胞,免疫印迹法(Westernblotting)检测各组细胞内β-NGF表达情况.体外分离培养LSCs,慢病毒共转染LSCs,分为对照组(未转染组)和诱导表达组[实验组A(慢病毒载体Dox 1000μg/L)、实验组B(慢病毒载体Dox 100μg/L)、实验组C(慢病毒空载体Dox 1000μg/L)],诱导表达48 h后细胞免疫荧光染色检测NGF及相关蛋白(p63、p38、TrkA)的表达情况.结果 NGF在转染细胞内被诱导表达,随着Dox剂量增加,表达量增强,差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组及实验组C相比,实验组A的p63表达降低,TrkA表达降低,p38表达增加,差异有统计学意义(P＜0.05);与对照组及实验组C相比,实验组B的p63表达增加,TrkA表达增加,p38表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 运用Tet-on3G四环素诱导表达系统,可成功诱导表达不同剂量β-NGF蛋白,低剂量Dox诱导下NGF产生的微环境可促进LSCs的体外扩增,并能维持LSCs的干细胞特性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李红	贵州医科大学组织	47	102	6.0	7.0
2	胡蓉	贵州医科大学组织学胚胎学教研室	17	21	3.0	3.0
3	高杰	贵州医科大学组织学胚胎学教研室	13	13	3.0	3.0
7	黄悦	贵州医科大学组织学胚胎学教研室	12	19	3.0	4.0
8	苏敏	贵州医科大学组织学胚胎学教研室	12	17	3.0	3.0
12	丁玲	贵州医科大学组织学胚胎学教研室	5	1	1.0	1.0