H7N9IAV PB1蛋白抑制Ⅰ型IFN信号通路

• 作者: 曾艳 朱启运 李郁 汪亮 王婉冰 王正祥 陈化兰 韩璐
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: H7N9 聚合酶碱性蛋白I(PB1) Ⅰ型干扰素(IFNs) 线粒体抗病毒信号分子(MAVS)
• 年，卷（期）: 2017,（7）
• 所属期刊栏目: 专题:不同亚型低致病性禽流感病毒生物学特性研究
• 页码范围: 1188-1196
• 页数: 9页
• 分类号: S855.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2017.07.017

摘要

H7N9 A型流感病毒(Influenza Avirus,IAV)是对公共卫生安全危害严重的新发人兽共患病病原.为了初步解析H7N9 IAV介导的天然免疫反应的分子机制,本研究将聚合酶碱性蛋白1(polymerase basic protein 1,PBl)基因克隆至pRK真核表达载体,并利用定点突变技术对PB1基因的第96位和第129位核苷酸分别进行定点突变,使其移框编码的PBl-F2基因不表达,排除PBl-F2基因对PB1后续研究的影响.随后,利用双荧光素酶报告基因系统和qRT-PCR分析PB1蛋白对Ⅰ型干扰素(interferons,IFNs)信号通路活化的影响;进而,通过免疫共沉淀实验确定PB1蛋白在维甲酸诱导基因Ⅰ样受体(retinoic-acidinducible gene Ⅰ (RIG-Ⅰ)-likc rcccptors,RLRs)信号通路中的作用靶点,最后在293T细胞中分别过表达PB1蛋白和线粒体抗病毒信号分子(mitochondrial antiviral signaling,MAVS)或RIG-Ⅰ,检测PB1对MAVS或RIG-Ⅰ表达量的影响.结果表明,PB1可以显著抑制IFN-β、干扰素刺激反应元件(IFN stimulated response element,ISRE)和核调节因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)报告基因的活性,并下调FN-β和干扰素诱导基因56(interferon stimulated gene 56,ISG56)、ISG15和CXC趋化因子配体10基因(c-x-cmotif chemokine 10,CXCL-10)的表达;PB1可以特异性地和RLRs信号通路中的MAVS相互作用,并且随着PB1蛋白表达的增加,MAVS的表达呈下降趋势,但RIG-Ⅰ的表达不受影响.因此,本研究的实验数据初步表明,H7N9PB1蛋白可特异性结合RLRs信号通路中重要接头分子MAVS,并能够降低其表达量,从而抑制Ⅰ型IFN基因的表达并阻断其发挥作用的下游信号通路.本研究结果明确了H7N9 IAV PBl蛋白在天然免疫信号通路中的作用靶点,为防控H7N9流感提供理论依据.