临床级脐带间充质细胞制备及鉴定方法研究

• 作者: 刘仲凤 唐玺和 张愚 王淑艳 袁艳鹏 陈志国
• 来源期刊: 中华细胞与干细胞杂志（电子版）
• 关键词: 脐带 间质细胞 胶原酶类 培养基、无血清 细胞分化
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 65-70
• 页数: 6页
• 字数: 4671字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3877/cma.j.issn.2095-1221.2017.02.001

摘要

目的 在GLP实验室中制备并鉴定临床级脐带间充质细胞(UC-MSC).方法 新鲜获取的脐带去除血管并进行充分清洗,获得的华通胶(Wharton's jelly)机械分离后分别进行直接贴壁法和不同的酶消化法,比较获取UC-MSC的数量差别;用不同的无血清培养基进行培养比较细胞形态是否良好,得到最佳形态的UC-MSC.体外培养第3代后进行UC-MSC质检,包括细胞活性,生长曲线,无菌检测,人类相关病毒、支原体、内毒素检测,染色体核型分析,FACS免疫表型检测及分化能力检测.不同消化方法获取细胞数之间比较采用两样本配对t检验.结果 胶原酶Ⅱ消化获得的UC-MSC数(5.3×106±0.58个/ml)与胶原酶Ⅰ+0.25％胰酶消化法(2.53×105±0.03个/ml)及直接贴壁法(2.6×105±0.05个/ml)之间差异有统计学意义(P＜0.05),与胶原酶Ⅰ消化法获取细胞数(5.1×106±0.57个/ml)之间差异无统计学意义(P=0.07),但培养视野最干净;MesenCult-ACF Medium培养获得的UC-MSC形态最佳;UC-MSC质检细胞活性冻存前达99.8％,冻存复苏后达99％;无细菌、支原体、乙肝病毒、丙肝病毒、梅毒螺旋体、艾滋病毒、肺炎支原体、EB病毒、巨细胞病毒污染;内毒素检测结果均＜1 EU;CD73/CD90/CD 105阳性率达98％,CD34/CD45/HLA-DR呈阴性,阳性率＜2％;染色体核型分析无突变或缺失;UC-MSC具有成脂、成骨或成软骨方向分化的能力.结论 通过优化分离和培养条件,采用无血清及无动物来源的培养系统,在GLP实验室内可获得临床级UC-MSC.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张愚	首都医科大学宣武医院细胞治疗中心	57	235	8.0	12.0
2	王淑艳	首都医科大学宣武医院细胞治疗中心	18	33	3.0	5.0
3	袁艳鹏	首都医科大学宣武医院细胞治疗中心	3	3	1.0	1.0
4	唐玺和	首都医科大学宣武医院细胞治疗中心	4	6	1.0	2.0
5	陈志国	首都医科大学宣武医院细胞治疗中心	8	10	2.0	3.0
6	刘仲凤	首都医科大学宣武医院细胞治疗中心	1	1	1.0	1.0