H3N2亚型犬流感病毒NP蛋白的表达纯化及多克隆抗体制备

• 作者: 夏兴霞 欧阳伟 毕振威 潘群兴 王晓丽 王永山 诸玉梅
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 犬流感病毒 H3N2亚型 核蛋白 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 病毒
• 页码范围: 1-6
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.5
• 字数: 4030字
• 语种: 中文

摘要

将分离的H3N2亚型犬流感病毒(Canine influenza virus,CIV) A/Canine/Nanjing/11/2012 (H3N2)株的核蛋白(NP)基因克隆至原核表达载体pET28a(+)中,构建重组表达质粒pET-NP,然后转化大肠杆菌E.coli Rosetta(DE)感受态细胞,经IPTG诱导后,采用SDS-PAGE和Western blot进行分析.结果显示,大肠杆菌表达的重组NP蛋白的分子量约为61 kDa,与预期相符,并能与犬CIV阳性血清发生特异性反应.将表达的重组NP蛋白进行纯化后,免疫大白兔制备抗NP蛋白多克隆抗体血清,Western blot检测该血清可与CIV的NP蛋白发生特异性反应,间接ELISA检测该多克隆抗体血清的效价达1:30 000,显示了较高的抗体效价.本研究为CIV快速检测方法的建立和流行病学调查奠定了科学依据.