eEF1A2基因沉默的原发性肝细胞癌BEL-7402细胞株的建立

• 作者: 伍严安 吴文冰 李峰 邱福南 陈敦雁 黄毅 黄肖利
• 来源期刊: 实验与检验医学
• 学科: 医学
• 关键词: 真核翻译延长因子1A2 原发性肝细胞癌 BEL-7402细胞 RNA干扰 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 148-152
• 页数: 5页
• 分类号: R735.7|R446.62
• 字数: 4590字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-1129.2017.02.004

摘要

目的 本研究旨在构建针对高表达真核翻译延长因子1A2(eEF1A2)的原发性肝细胞癌(HCC)BEL-7402细胞株的eEF1A2-RNAi的细胞模型,为从基因沉默基因敲除层面研究eEF1A2在HCC潜在的致癌作用的功能奠定实验基础.方法 通过针对eEF1A2基因的shRNA与线性化的GV115-GFP载体进行连接转化,对获得的重组子(GV115-GFP-eEF1A2-shRNA)进行PCR和测序鉴定.采用慢病毒载体系统将pHelper 1.0载体、pHelper 2.0载体与GV115-GFP-eEF1A2-shRNA共转染293T细胞,包装成eEF1A2-RNAi-LV,并感染高表达eEF1A2的BEL-7402细胞.采用Real time PCR和Western blot法分别从mRNA和蛋白水平验证eEF1A2-RNAi-LV对BEL-7402细胞eEF1A2表达的抑制作用.结果 成功构建了重组真核表达载体GV115-GFP-eEF1A2-shRNA,并通过慢病毒载体系统包装成eEF1A2-RNAi-LV;将eEF1A2-RNAi-LV转染至BEL-7402细胞后,细胞eEF1A2 mRNA和蛋白的表达水平分别下降了84.1%和64.5%,与阴性对照组相比较具显著性差异(P<0.01),表明转染后的BEL-7402细胞eEF1A2基因被特异性沉默.结论 成功构建了eEF1A2-RNAi的BEL-7402细胞模型,为进一步从基因敲除层面研究eEF1A2在HCC潜在的致癌作用奠定了良好的实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邱福南	福建医科大学省立临床医学院肝胆外科	14	21	3.0	4.0
2	伍严安	福建医科大学省立临床医学院检验科	35	122	7.0	9.0
3	黄毅	福建医科大学省立临床医学院检验科	13	57	5.0	7.0
4	黄肖利	福建医科大学省立临床医学院检验科	10	41	4.0	6.0
5	李峰	福建医科大学省立临床医学院病理科	16	44	4.0	6.0
6	陈敦雁	福建医科大学省立临床医学院检验科	5	4	1.0	1.0