靶向Polo-like kinase1基因的shRNA对肝癌BEL-7402细胞株生物学行为的影响

• 作者: 何自力 刘威 文宇 苗雄鹰 郑核 钟德玝 陈广
• 来源期刊: 中国现代手术学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝肿瘤,实验性 RNA干扰 Plk1
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 手术学研究
• 页码范围: 401-406
• 分类号: R730.23
• 字数: 5890字
• 语种: 中文

摘要

目的 利用RNA(RNAi)干扰技术,研究表达Polo-like kinase 1(Plk1)的短发夹RNA( shRNA)载体对肝癌细胞株BEL-7402生物学行为的影响.方法 根据靶基因的不同区域构建针对Plk1mRNA的两组干扰质粒shRNA- Plk1:Plk1siRNA-251,Plk1siRNA-1396以及阴性对照质粒Plk1siRNAhk,利用电穿孔法转染入肝癌细胞株BEL-7402,获得稳定表达的克隆后,RT-PCR检测肝癌细胞株BEL7402的Plk1mRNA的变化,Western blot检测Plk1蛋白的表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期变化.结果 利用电穿孔将载体转入肝癌细胞株BEL-7402,利用G418筛选,获得稳定表达的克隆.RT-PCR检测Plk1siRNA-251,Plk1siRNA-1396组Plk1mRNA表达较Plk1siRNA-hk转染组与空白对照组明显下降(P＜0.01).Western blot检测转染BEL-7402细胞shRNA载体后的Plk1蛋白的表达分别为0.032±0.007、0.040±0.008、0.272±0.041、0.278±0.053.MTT检测发现转染shRNA载体后BEL-7402细胞增殖明显减慢.细胞周期检测证实转染Plk1siRNA可以引起BEL-7402细胞G0/G1期减少,G2/M期增高,而对S期影响不大.结论 成功构建出两条能特异而高效抑制Plk1基因表达的shRNA,可以显著抑制Plk1 mRNA的转录及Plk1蛋白的表达,并明显抑制细胞增殖,从而为肝癌的基因治疗提供新的切入点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	苗雄鹰		172	706	12.0	18.0
2	钟德玝		113	716	13.0	22.0
3	刘威		34	228	8.0	14.0
4	文宇		60	167	8.0	11.0
5	郑核		11	29	3.0	5.0
6	何自力		8	46	3.0	6.0
7	陈广		8	20	3.0	4.0