靶向Plk1基因的shRNA对肝癌BEL-7402细胞株生物学行为及化疗增敏的影响

• 作者: 何自力 刘威 文宇 苗雄鹰 郑核 钟德玝 陈广
• 来源期刊: 中国现代手术学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝肿瘤,实验性 RNA干扰 长春新碱
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 手术学研究
• 页码范围: 2-7
• 分类号: R730.23
• 字数: 5072字
• 语种: 中文

摘要

目的 利用RNA干扰技术(RNAi),研究表达Polo-like kinase 1 (Plk1)的短发夹RNA (shRNA)载体对肝癌细胞株BEL-7402生物学行为及对化疗药物长春新碱敏感性的影响. 方法 根据靶基因的不同区域构建针对Plk1mRNA的两组干扰质粒shRNA-Plk1:Plk1siRNA-251,Plk1siRNA-1396以及阴性对照质粒Plk1siRNA-hk,利用电穿孔法转染入肝癌细胞株BEL-7402,用长春新碱处理细胞后,用MTT法检测四组细胞的生长抑制率,计算IC50值,流式细胞仪检测各组细胞凋亡. 结果 半定量RT-PCR检测Plk1siRNA-251,Plk1siRNA-1396组Plk1mRNA、Cdc25CmRNA表达较Plk1siRNA-hk转染组与空白对照组明显下降(P＜0.01),p53mRNA表达增加.长春新碱处理后,Plk1siRNA-251组和Plk1siRNA-1396组与BEL7402组之间的生长抑制率有显著性差异(P＜0.01).5 μg/ml浓度长春新碱作用24h后,Plk1siRNA-251组和Plk1siRNA-1396组凋亡指数分别为19.09％ ±3.97％、19.80％ ±5.47％明显高于Plk1siRNA-hk组和BEL7402组(P＜0.01).结论 成功筛选出两条能特异而高效抑制Plk1基因表达的shRNA,可以显著抑制Plk1 mRNA、Cdc25CmRNA及Plkl蛋白的表达,并使p53mRNA表达增高,并明显抑制细胞增殖,能增加长春新碱的化疗敏感性,从而为进一步研究该基因的功能和作用机制提供了新的手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	苗雄鹰		172	706	12.0	18.0
2	钟德玝		113	716	13.0	22.0
3	刘威		34	228	8.0	14.0
4	文宇		60	167	8.0	11.0
5	郑核		11	29	3.0	5.0
6	何自力		8	46	3.0	6.0
7	陈广		8	20	3.0	4.0