HILIC-MS/MS法测定人尿中内源性糖类化合物浓度

• 作者: 刘峰 成玉 朱帮杰 李熙拓 王彦 闫超
• 来源期刊: 药物分析杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 内源性代谢物质 尿液样品 糖类化合物 靶标验证 代谢组学 亲水色谱 串联质谱
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 代谢分析
• 页码范围: 1046-1055
• 页数: 10页
• 分类号: R917
• 语种: 中文
• DOI: 10.16155/j.0254-1793.2017.06.17

摘要

目的:利用亲水色谱-质谱联用技术对人尿中15个内源性糖类化合物进行快速测定.方法:分别对色谱条件、质谱条件和样品前处理方法进行优化,最终以含内标的甲醇-乙腈(50∶50,v/v)为沉淀剂,按体积比5∶1加入到尿液中除杂,以含10 mmol·L-1醋酸铵的水-乙腈(95∶5,v/v)和含10 mmol·L-1醋酸铵的乙腈-水(95∶5,v/v)为流动相,梯度洗脱,样品经ACQUITY UPLC BEH Amide(2.1 mm× 100 mm,1.7μm)色谱柱分离,在多反应监测(MRM)模式下,采用电喷雾离子化源、负离子扫描模式进行定量分析.结果:人尿中糖类物质线性关系良好,大部分糖类物质r＞0.99,最低检测限在0.075～30 nmol·L-1之间;日内、日间精密度范围分别为2.5％～7.6％和3.3％～7.3％,均小于15％;回收率范围为85.5％～ 115％;大部分化合物的基质效应在80％～ 120％之内,样品上清液4 ℃稳定性好,72 h内浓度变化范围为93.1％～106％,最终测得20例健康人尿液中各糖的含量分别为(平均值±标准误差):楝二糖(2 668.1±134.4) nmol·L-1,蔗糖(5 070.6±277.6) nmol· L-1,麦芽糖(15 214.5±442.5)nmol· L-1,麦芽三糖(849.7±42.6)nmol· L-1,葡萄糖(173 965.0±4 918.9) nmol· L-1,果糖(22 172.5±1 463.6) nmol· L-1,棉子糖(292.1±17.6) nmol·L-1,肌苷(2 083.5±93.4) nmol·L-1,腺苷(2 645.5±78.2) nmol·L-1,甘露糖醇(83 925.0±3 938.6) nmol·L-1,赤藓糖醇(375 805.0±12 094.6) nmol· L-1,阿拉伯糖醇(192 921.1±5 689.2) nmol·L-1,麦芽四糖、木糖和核糖均低于定量限(分别低于60、600和3 000 nmol·L-1).结论:该方法能快速测定人尿液中15个内源性糖类化合物含量,对代谢组学后期的靶标验证、代谢机理研究等具有重要意义.