马铃薯青枯病病菌PMA-PCR活菌检测体系优化与初步应用

• 作者: 刘霞 杨艳丽 高达芳
• 来源期刊: 中国植保导刊
• 学科: 农学
• 关键词: 马铃薯青枯病病菌 叠氮溴化丙锭(PMA) PCR
• 年，卷（期）: 2017,（10）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 5-13
• 页数: 9页
• 分类号: S435.32
• 字数: 5334字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-6820.2017.10.001

摘要

应用叠氮溴化丙锭(PMA)与PCR技术相结合,建立一种有效快速检测包括活的非可培养状态(Viable But Non-Culturable,VBNC)在内的马铃薯青枯菌活菌的方法.根据青枯菌lpxC基因序列设计特异性引物lpxC5a/6a,探究不同PMA浓度、曝光时间对浓度为1×109 cfu/mL的热致死菌悬液中死亡菌体抑制效果的影响,确定PMA最佳处理方案,对采自云南地区的19份田间土样中的包括VBNC状态在内的青枯菌活菌进行检测.结果显示,引物lpxC5a/6a可特异性扩增青枯菌而产生304 bp的条带.当样品中PMA终浓度为40μmol/L,650 W卤素灯曝光15 min,PMA可有效抑制死亡菌体的扩增,而对包括VBNC状态在内的青枯菌活菌的扩增没有影响.在19份田间土样检测中,有7份土样检测出存在青枯活菌.