鸡源Wnt3a融合蛋白表达载体的构建及其对鸡胚脊髓神经前体细胞增殖和轴突形成的影响

• 作者: 张必超 朱少义 李秋玲 杨慈清 林俊堂
• 来源期刊: 解剖学报
• 学科: 生物学
• 关键词: Wnt3a 增殖 轴突形成 活体原位电转 免疫荧光 鸡胚
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 神经生物学
• 页码范围: 7-13
• 分类号: Q954.48
• 语种: 中文
• DOI: 10.16098/j.issn.0529-1356.2017.01.002

摘要

目的 构建鸡源Wnt3a融合蛋白真核表达载体(pCAG-MCs-Wnt3 a-EGFP),并探讨其在鸡胚脊髓发育过程中超表达后对神经前体细胞增殖及轴突形成的影响.方法 利用分子生物学手段,提取鸡胚脊髓总RNA并获得Wnt3a片段,将其克隆到pCAG-MCs-EGFP载体中构建pCAG-MCs-Wnt3a-EGFP表达载体.在鸡胚发育至2.5～3d (E2.5～E3)时,利用鸡胚活体电转技术将pCAG-MCs-Wnt3a-EGFP(实验组)和pCAG-MCs-EGFP(对照组)质粒分别转入鸡胚脊髓,E4时取材切片,每组5个胚胎组织,采用免疫荧光染色技术检测Wnt3a和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达变化分析Wnt3a与细胞增殖间的关系,根据载体自发绿色荧光蛋白(GFP)观察脊髓神经前体细胞轴突生成情况.结果 pCAG-MCs-Wnt3a-EGFP表达载体基因测序结果与Gene bank中基因序列一致,将pCAG-MCs-Wnt3a-EGFP入鸡胚脊髓中发现绿色荧光.在脊髓组织切片水平上,免疫荧光染色结果表明,Wnt3a在鸡胚脊髓中能够超表达.Wnt3a超表达后,与对照组比较,含有轴突的神经元数量明显减少(n=3,P＜0.01),而PCNA的表达量显著增加(n=3,P＜0.01).结论 成功构建了鸡源性Wnt3a融合蛋白真核表达载体,并证实Wnt3a在鸡胚发育过程中促进神经前体细胞的增殖并抑制轴突的形成.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨慈清	新乡医学院生命科学技术学院	39	83	6.0	6.0
5	林俊堂	新乡医学院生命科学技术学院	61	101	5.0	6.0
9	张必超	新乡医学院生命科学技术学院	9	11	2.0	3.0
10	李秋玲	新乡医学院生命科学技术学院	1	3	1.0	1.0
11	朱少义	新乡医学院生命科学技术学院	2	5	2.0	2.0