环介导等温扩增法检测粪样中日本血吸虫虫卵DNA的效果评估

• 作者: 冯婷 吕山 周杰 曹淳力 李石柱 祝红庆 秦志强 许静 钱颖骏
• 来源期刊: 中国寄生虫学与寄生虫病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 日本血吸虫 虫卵 核酸 环介导等温扩增 效果评估
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 230-234
• 页数: 5页
• 分类号: R383.24
• 语种: 中文

摘要

目的 评估环介导等温扩增(loop mediated isothermal amplification,LAMP)法检测粪样中日本血吸虫(Schistosoma japonicum)虫卵DNA的效果,并评价其检测流行区现场牛野外粪样的效果.方法 取1g新鲜的日本血吸虫虫卵阴性牛粪,分别加入5个新鲜日本血吸虫虫卵、50 μ1日本血吸虫虫卵排泄分泌产物(eggsecretion product,ESP)制备人工模拟阳性粪样.用粪DNA提取试剂盒分别提取加入虫卵的未经研磨或研磨2 min后的人工模拟阳性粪样、加入虫卵ESP的粪样和阴性粪样的DNA,以日本血吸虫28S核糖体DNA (rDNA)为检测靶基因,用LAMP法、PCR法检测,评估LAMP法检测粪样中日本血吸虫虫卵DNA的效果.收集2012-2014年湖南、湖北、江西、安徽等4省日本血吸虫病流行区的牛野外粪样221份,研磨后同法提取DNA,用LAMP法检测,并与PCR法、孵化法的检测结果进行比较,评价其检测流行区现场野外粪样的效果.结果 LAMP法检测加入虫卵粪样并经研磨后提取的DNA、加入虫卵ESP粪样提取的DNA均为阳性反应,呈绿色;而加入虫卵粪样未经研磨提取的DNA、阴性粪样DNA则为阴性反应,呈棕色;PCR检测的结果与LAMP法检测结果相近.LAMP法、PCR法和孵化法检测血吸虫病流行区牛野外粪样的阳性率分别为5.43％(12/221)、4.52％(10/221)、0.90％ (2/221).LAMP法的阳性率明显高于孵化法(P＜0.05),LAMP法与PCR法阳性率差异无统计学意义 (P＞ 0.05).结论 LAMP法可用于检测流行区现场野外粪样的日本血吸虫虫卵DNA,其现场应用价值有待进一步验证.