重组腺病毒介导人类白细胞抗原-G 基因转染恒河猴树突状细胞对 T 细胞的增殖作用

• 作者: 于恒海 田大广 胡明道 陈哲 陈鹏 魏晓平
• 来源期刊: 医学研究生学报
• 学科: 医学
• 关键词: 人类白细胞抗原-G基因 T细胞 免疫耐受 恒河猴
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 论著 -- 基础研究
• 页码范围: 5-9
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 字数: 4288字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16571/j.cnki.1008-8199.2017.01.002

摘要

目的：人类白细胞抗原-G（HLA-G）通过与树突状细胞（DC）表面的免疫球蛋白样转录体（ILT2）和 ILT4（ CD85d）结合，广泛参与机体的免疫耐受的过程。探讨经HLA-G重组腺病毒载体感染后的恒河猴未成熟树突状细胞刺激T细胞的增殖作用。方法麻醉恒河猴获取新鲜骨髓血，采用密度梯度离心法，分离获得的单个核细胞行免疫磁珠法获得CD34＋细胞。添加小剂量细胞因子联合诱导分化CD34＋细胞，从而获得树突状细胞。介导HLA-G的重组腺病毒经过转染未成熟树突状细胞后，检测病毒感染效率，Western blot检测HLA-G在未成熟树突状细胞中的表达。以恒河猴T细胞作为反应细胞，将介导HLA-G的重组腺病毒转染的不同状态下的DC为刺激细胞，进行混合淋巴细胞实验。设置5组：即成熟树突状细胞组（ mDC组）；未成熟树突状细胞组（ imDC组）；imDC（ L）组：在第7天成功获得imDC后加入脂多糖100 ng／mL；imDC（ V）组：重组腺病毒介导HLA-G感染的imDC，方法同前；imDC（ L＋V）组：重组腺病毒同样转染imDC，同时在培养过程中添加100 ng／mL的脂多糖。根据DC与T细胞不同比例（1∶5、1∶10、1∶20、1∶40）计算各组刺激指数（SI）。结果成功培养获得恒河猴未成熟树突状细胞，HLA-G在该细胞中表达。流式细胞术检测结果发现DC的纯度高达92．3％，imDC组则高达72．39％， CD4＋T细胞阳性率纯度＞80％。混合淋巴细胞实验分析DC刺激T细胞增殖结果表明，不同DC与T细胞比例（1∶5、1∶10、1∶20、1∶40）下，imDC组SI为1．63±0．03、1．52±0．04、1．39±0．03和1．21±0．01；mDC组SI为2．23±0．05、2．01±0．031、．65±0．02和1．54±0．05；imDC（L）组SI为2．25±0．04、1．96±0．02、1．62±0．03和14．8±0．01；imDC（V）组SI为1．46±0．04、1．33±0．02、1．20±0．04和1．04±0．02；imDC（L＋V）组SI为1．67±0．031、．59±0．04、1．38±0．03和1．24±0．03。与imDC 组比较，mDC组、 imDC（L ）组SI明显增高（ P＜0．01）；与imDC（ V）组比较，imDC组、mDC组、imDC（ L）组、imDC（ L＋V）组SI明显增高（ P＜0．01）；与imDC（ L＋V）组比较，mDC组、imDC（ L）组SI明显增高（ P＜0．01）。结论重组腺病毒介导HLA-G转染的恒河猴未成熟树突状细胞能够有效抑制恒河猴T细胞的增殖。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈鹏	昆明医科大学第二附属医院肝胆胰外科	43	133	7.0	9.0
2	胡明道	昆明医科大学第二附属医院肝胆胰外科	23	75	6.0	7.0
3	陈哲	昆明医科大学第二附属医院肝胆胰外科	1	2	1.0	1.0
4	田大广	昆明医科大学第二附属医院肝胆胰外科	4	2	1.0	1.0
5	魏晓平	昆明医科大学第二附属医院肝胆胰外科	4	2	1.0	1.0
6	于恒海	昆明医科大学第二附属医院肝胆胰外科	4	12	2.0	3.0