缺血再灌注损伤脑微血管内皮细胞Necroptosis模型的建立

• 作者: 万亮琴 于雪 姜昭妍 张凡 张赛 李卫红 李芳赫 王淑艳 胡艳红 臧妍妍 苏靖 雷洪涛 马家宝
• 来源期刊: 世界中医药
• 学科: 医学
• 关键词: 脑微血管内皮细胞 Necroptosis z-VAD-FMK 缺血再灌注损伤
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 879-883
• 页数: 5页
• 分类号: R965
• 字数: 4715字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-7202.2017.04.043

摘要

目的:采用拟缺血再灌注损伤结合z-VAD-FMK(Benzyloxyearbonyl-Val-Ala-Asp-fluoromethylketone,z-VAD-FMK)干预,探索一种脑微血管内皮细胞(Brain Microvascular Endothelial Cells,BMECs)Necroptosis模型.方法:首先利用原代大鼠脑微血管内皮细胞,采用氧糖剥夺及复氧复糖方法,筛选出拟缺血再灌注损伤时间点.在拟缺血再灌注模型基础上,予Casepase抑制剂z-VAD-FMK 20 μmol/L干预,采用CCK-8检测细胞活性;透射电镜观察细胞超微结构;Annexin V-FITC/PI(Propidium Iodide)双染色法检测细胞死亡方式.结果:确定氧糖剥夺2 h复氧复糖8 h,作为拟缺血再灌注时间点;z-VAD-FMK作用于拟缺血再灌注损伤BMECs后,细胞活性无统计学意义;z-VAD-FMK干预组在电镜下呈现明显的Necroptosis特征;流式检测显示,各象限细胞比率无明显变化,但Necroptosis特异性抑制剂Nec-1可显著降低Q2象限细胞比率,提示z-VAD-FMK干预抑制了细胞晚期凋亡,诱导了Necroptosis的发生.结论:z-VAD-FMK可诱导拟缺血再灌注脑微血管内皮细胞发生Necroptosis,为以后研究缺血性脑中风necroptosis机制提供了细胞实验模型.