原核系统表达的鸡白细胞介素-10的鼠抗血清体内研究的初步分析

• 作者: 孟兴 彭蔚宇 杨柳 王丽廷 王兴童 陈洪岩 韩凌霞 高文伟
• 来源期刊: 实验动物科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 鸡白介素-10 原核表达 鼠抗血清 体内实验
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: Q95-3
• 字数: 3377字
• 语种: 中文

摘要

目的 获得鸡白介素-10(chIL-10)的原核表达产物,制备鼠抗血清,分析与真核系统表达的chIL-10的反应原性.方法 采用RT-PCR从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中扩增编码成熟IL-10的基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),成功构建原核重组质粒pET-chIL-10;转化至大肠杆菌DH5α中IPTG诱导表达,切下含有重组蛋白的SDS-PAGE胶条,免疫制备鼠抗血清;分别与包含信号肽和去除信号肽的chIL-10真核表达细胞系CHO-euchIL-10F和CHO-euchIL-10M进行间接免疫荧光抗体试验(IFA)和蛋白免疫印迹试验(Western blot),验证有无反应性.结果 成功构建chIL-10的原核表达载体pET-chIL-10,获得了高效价的鼠抗血清,能与表达chIL-10的真核细胞系反应.结论 原核表达的chIL-10特异性鼠抗血清将能用于体内研究的检测.